Name: Szybkie wykrywanie antygenu kałowego zakażenia Helicobacter pylori w oparciu o technologię wykrywania kanapek z podwójnym przeciwciałem (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:35:00.000+00:00
Duration: 3 min 33 s
Description: Poznaj szybką metodę wykrywania antygenu kałowego Helicobacter pylori opartą na technologii kanapki z podwójnym przeciwciałem. To podejście zwiększa czułość i swoistość diagnostyki.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

To badanie przekrojowe zostało zatwierdzone przez Komisję Bioetyczną Prowincjonalnego Szpitala Ludowego w Guangdong (numer zgody: KY2024-445-01), a dane osobowe wszystkich uczestników badania były ściśle poufne podczas badania. Wszyscy uczestnicy podpisali pisemną świadomą zgodę przed eksperymentami. Mieszkańcy wioski Shitan w mieście Qingyuan w prowincji Guangdong w 2024 roku zostali wybrani jako obiekty badawcze i nie było żadnych ograniczeń co do wieku i płci. Opisany poniżej test kanapkowy z podwójnym przeciwciałem (eksperyment jakościowy) został wykonany przez profesjonalny personel medyczny i techniczny zgodnie z instrukcją. Do badań wybrano całą stałą populację wsi, niezależnie od tego, czy była zdrowa, czy miała objawy, czy też jakiekolwiek istniejące choroby związane z chorobami przewodu pokarmowego.
1. Selekcja pacjentów
<ol>
	<li>Wyklucz pacjentów, jeśli w ciągu ostatniego 1 miesiąca stosowali inhibitory pompy protonowej lub bizmut, blokery receptoraH2 lub antybiotyki.</li>
	<li>Poproś wszystkich uczestników o anonimowe wypełnienie kwestionariusza. Treść kwestionariusza obejmuje pięć pytań: Czy regularnie jesz trzy posiłki? Czy pijesz alkohol? Czy znasz H. pylori? Czy uważa Pan/Pani, że konieczne jest przeprowadzenie inspekcji H. pylori ? Czy rozumiesz negatywne konsekwencje zakażenia H. pylori ?</li>
</ol>
2. Procedura wykrywania antygenu zakażenia H. pylori w kale
UWAGA: Algorytm badania antygenu kału H. pylori został opracowany w celu zapewnienia dokładności i wiarygodności wyników, z uwzględnieniem prostoty i higieny. Cały proces podzielony jest na pięć etapów: pobieranie próbki, przetwarzanie próbki, przechowywanie próbki, wykrywanie i interpretacja wyników. Działający schemat blokowy i schemat ideowy wykrywania próbki pokazano na rys. 1 i rys. 2.
<ol>
	<li>Pobieranie próbek UWAGA: Do pobierania próbek należy używać pojemników specyficznych dla antygenu H. pylori . Próbek nie należy mieszać z wodą, moczem, środkami dezynfekującymi i ściekami.<ol>
		<li>Po zakończeniu defekacji zdjąć górną pokrywę specjalnego pojemnika, aby wyjąć pręt do pobierania próbek.</li>
		<li>Wkładać pręt do pobierania próbek w sposób ciągły w pięciu różnych pozycjach stołka w celu pobrania próbek, upewniając się, że gwintowany koniec pręta do pobierania próbek jest całkowicie włożony do stołka.</li>
		<li>Po zakończeniu pobierania próbek włożyć pręt do pobierania próbek z powrotem do probówki z odczynnikiem; Objętość próbki wynosi łącznie ~5-50 mg.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przetwarzanie próbek<ol>
		<li>Potrząsaj probówką z odczynnikiem z boku na bok przez ~10 s, aby dokładnie wymieszać próbkę kału w rozcieńczalniku (główne składniki: kwas etylenodiaminotetraoctowy, hydrat tetrasodu 0,018 g/ml i chlorek sodu 0,01 g/ml).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Przechowywanie próbek<ol>
		<li>Zbadać próbki jak najszybciej po ich pobraniu; przechowywać je w temperaturze pokojowej nie dłużej niż 6 godzin i w warunkach chłodniczych (nie dłużej niż 72 godziny w temperaturze 2–8 °C i nie dłużej niż 6 miesięcy w stanie zamrożonym w temperaturze od -25 °C do -15 °C), jeśli jest to konieczne, aby spowolnić degradację antygenu i aktywność mikrobiologiczną. UWAGA: Próbki można wielokrotnie zamrażać i rozmrażać do 3 razy, a zarówno schłodzone, jak i zamrożone próbki należy przywrócić do temperatury pokojowej przed badaniem.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Wykrywanie próbek<ol>
		<li>Otwórz białą pokrywę na pokrywie probówki z odczynnikiem i trzymaj probówkę z odczynnikiem w pozycji pionowej.</li>
		<li>Dociśnij pokrywę do najniższego punktu, tak aby próbka przepływała po karcie testowej, przechodząc przez obszar wykrywania (T) i obszar kontroli jakości (C) pokryty mysim przeciwciałem anty-Hp.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Interpretacja wyników<ol>
		<li>Odczekaj 10-20 minut, aby dowolny antygen H. pylori w próbce, jeśli jest związany z przeciwciałem, utworzył makroskopową reakcję chromogenną w obszarze wykrywania. Zwykle pojawia się jako czerwona lub fioletowa linia, która kontrastuje z linią w obszarze kontroli jakości.</li>
		<li>Obecność lub brak reakcji barwy i głębia koloru są związane ze stężeniem antygenu H. pylori w próbce. Porównaj karty kolorów, aby szybko i dokładnie zinterpretować wyniki (patrz rysunek 3).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Ekstrakcja DNA
<ol>
	<li>Umieść odpowiednią ilość kału w probówce, dodaj roztwór PBS i dokładnie wymieszaj, wstrząsając. Mieszaninę odwirować przy 12 000 × g przez 5-10 minut, a następnie ostrożnie zebrać 200 μl supernatantu do dalszej ekstrakcji.</li>
	<li>Na podstawie liczby próbek przygotuj równą liczbę probówek wirówkowych o pojemności 1,5 ml. Do każdej probówki dodać kolejno 20 μl proteinazy K (20 mg/ml), 10 μl kulek magnetycznych, 200 μl supernatantu próbki i 200 μl buforu do lizy A. Dokładnie wymieszać, odwracając probówki, a następnie inkubować w metalowej łaźni w temperaturze 55 °C przez 10 minut.</li>
	<li>Po zakończeniu pirolizy umieść probówkę wirówkową na ramie magnetycznej, odstaw i pozwól na adsorpcję przez 1 minutę na kulkach. Po całkowitym sklarowaniu cieczy w probówce należy wyrzucić supernatant i starać się unikać naruszania kulek magnetycznych.</li>
	<li>Wyjmij probówki ze stojaka magnetycznego i umieść je na stojaku na probówki wirówkowe o pojemności 1.5 ml. Za pomocą pipety dodaj 500 μl buforu płuczącego E do każdej probówki, dokładnie mieszaj przez 1 minutę, a następnie włóż probówki z powrotem do stojaka magnetycznego. Odstawić probówki na 1 minutę, po sklarowaniu wyrzucić supernatant i unikać zasysania kulek magnetycznych.</li>
	<li>Powtórzyć proces mycia, dodając 500 μl buforu płuczącego W2 do każdej probówki. Dokładnie mieszaj przez 1 min, umieść probówki na stojaku magnetycznym i odstaw na 1 min. Po sklarowaniu roztworu należy ostrożnie wyrzucić supernatant, upewniając się, że kulki magnetyczne pozostają nienaruszone.</li>
	<li>Dodać 100 μl eluentu, wymieszać i inkubować w temperaturze 55 °C przez 5 minut.</li>
	<li>Umieść probówki na stojaku magnetycznym i odstaw je na 2 minuty. Gdy roztwór się sklaruje, ostrożnie przenieś wyluzowany kwas nukleinowy do nowej probówki wirówkowej, unikając zasysania kulek magnetycznych.</li>
	<li>Ocenić czystość wyekstrahowanego DNA, mierząc absorbancję przy 260 nm (A260) i 280 nm (A280). Oblicz stosunek A260/A280 , który powinien być idealnie większy niż 1,8 dla DNA o wysokiej czystości.</li>
</ol>
4. qPCR do wykrywania H. pylori i oporności na antybiotyki
UWAGA: Przeprowadziliśmy qPCR w celu wykrycia zakażenia H. pylori poprzez amplifikację genu mocznika . Wszystkie produkty negatywnej kontroli jakości to sterylna, oczyszczona woda. Produktem pozytywnej kontroli jakości w zestawie do wykrywania kwasów nukleinowych H. pylori są inaktywowane standardowe kulki H. pylori (ATCC 43504). AC T ≤ 30 z typową krzywą w kształcie litery S jest uważany za dodatni.
<ol>
	<li>W zależności od liczby próbek, które mają być badane, wyjmij liofilizowany preparat H. pylori z zestawu i szybko go odwiruj, aby liofilizowany proszek pozostał na dnie probówki.</li>
	<li>Ostrożnie otworzyć pokrywę liofilizowanego preparatu; pobrać kwas nukleinowy z próbki, która ma być poddana badaniu; dodać 25 μl próbki kwasu nukleinowego do preparatu liofilizowanego; i szczelnie przykryj rurkę.</li>
	<li>Wstrząśnij i równomiernie wymieszaj odczynnik PCR przez 8-10 s, a następnie szybko wiruj przez 3-5 s.</li>
	<li>Dla każdej próbki na 32-dołkowej płytce należy przygotować 25 μl mieszaniny reakcyjnej PCR (liofilizowany proszek [zawierający enzym Taq (5 U/μL), trifosforan dezoksyrybonukleozydu (2,5 mmol/l), enzym UNG (2 U/μl), mocznik do przodu (5'-ACATTGCGAGCGGGACAG-3') i do tyłu (5'-CGCCCAATCTCACTTTATCG-3') starterów (40 μmol/L)]) oraz 25 μl (2,5 μg) wyekstrahowanego DNA.</li>
	<li>Uruchom 32-dołkową płytkę qPCR na maszynie qPCR. Zaprogramować termocykler: 42 °C i 95 °C (oba na jeden cykl) na 2 minuty każdy; 95 °C przez 10 s i 65 °C przez 45 s (dwa kroki to jeden cykl) przez 10x; 95 °C przez 10 s i w temperaturze 58 °C przez 45 s (dwa kroki to jeden cykl) przez 35 cykli.</li>
	<li>Przeanalizuj dane za pomocą specjalnego oprogramowania do qPCR i pozwól urządzeniu automatycznie wybrać progi linii bazowej.</li>
</ol>
5. Analiza statystyczna
<ol>
	<li>Użyj testu chi-kwadrat do analizy danych eksperymentalnych w celu oceny spójności między tą metodą a wynikami qPCR i porównaj dodatni wskaźnik badań przesiewowych tej technologii z danymi dotyczącymi dodatniego wskaźnika infekcji H. pylori na szerszą skalę (np. w całym kraju). Rozważ różnice istotne statystycznie przy P < 0,05.</li>
</ol>

<ol><li>Ali, A., AlHussaini, K. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori%3A+A+contemporary+perspective+on+pathogenesis%2C+diagnosis+and+treatment+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori: A contemporary perspective on pathogenesis, diagnosis and treatment strategies.</a> Microorganisms. 12 (1), 222(2024).</li>
<li>Kusters, J. G., van Vliet, A. H., Kuipers, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+Helicobacter+pylori+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of Helicobacter pylori infection.</a> Clin Microbiol Rev. 19 (3), 449-490 (2006).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+Helicobacter+pylori+infection+and+incidence+of+gastric+cancer+between+1980+and+2022%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of Helicobacter pylori infection and incidence of gastric cancer between 1980 and 2022.</a> Gastroenterology. 166 (4), 605-619 (2024).</li>
<li>Malfertheiner, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+Helicobacter+pylori+infection-the+Maastricht+V%2FFlorence+Consensus+Report%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Management of Helicobacter pylori infection-the Maastricht V/Florence Consensus Report.</a> Gut. 66 (1), 6-30 (2017).</li>
<li>Hooi, J. K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+Helicobacter+pylori+infection%3A+Systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of Helicobacter pylori infection: Systematic review and meta-analysis.</a> Gastroenterology. 153 (2), 420-429 (2017).</li>
<li>Burucoa, C., Axon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Helicobacter+pylori+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Helicobacter%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Helicobacter pylori infection.</a> Helicobacter. 22 (Suppl 1), (2017).</li>
<li>Atkinson, N. S., Braden, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+infection%3A+Diagnostic+strategies+in+primary+diagnosis+and+after+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori infection: Diagnostic strategies in primary diagnosis and after therapy.</a> Dig Dis Sci. 61 (1), 19-24 (2016).</li>
<li>Owot, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+performance+of+fecal+Helicobacter+pylori+antigen+test+in+Uganda%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Diagnostic performance of fecal Helicobacter pylori antigen test in Uganda.</a> BMC Gastroenterol. 22 (1), 518(2022).</li>
<li>Kornoukhova, L. A., Emanuel, V. L., Denisov, N. L., Nikonov, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+infection%3A+place+of+serological+and+cultural+diagnostics+in+clinical+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Klin+Lab+Diagn%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori infection: place of serological and cultural diagnostics in clinical guidelines.</a> Klin Lab Diagn. 66 (8), 496-501 (2021).</li>
<li>Boltin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+quantitative+13C-urea+breath+test+and+Helicobacter+pylori+treatment+success+in+a+population-based+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterol+Res+Pract%22%5BJournal%5D)">Correlation between quantitative 13C-urea breath test and Helicobacter pylori treatment success in a population-based cohort.</a> Gastroenterol Res Pract. 2018, 5439539(2018).</li>
<li>Gingras, B. A., Maggiore, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+a+new+molecular+assay+for+the+detection+of+gastrointestinal+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Access+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Performance of a new molecular assay for the detection of gastrointestinal pathogens.</a> Access Microbiol. 2 (10), acmi000160(2020).</li>
<li>Hussein, R. A., Al-Ouqaili, M. T. S., Majeed, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Helicobacter+pylori+infection+by+invasive+and+non-invasive+techniques+in+patients+with+gastrointestinal+diseases+from+Iraq%3A+A+validation+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Detection of Helicobacter pylori infection by invasive and non-invasive techniques in patients with gastrointestinal diseases from Iraq: A validation study.</a> PLoS One. 16 (8), e0256393(2021).</li>
<li>Ishino, Y., Krupovic, M., Forterre, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+CRISPR-Cas+from+encounter+with+a+mysterious+repeated+sequence+to+genome+editing+technology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">History of CRISPR-Cas from encounter with a mysterious repeated sequence to genome editing technology.</a> J Bacteriol. 200 (7), e00580-e00617 (2018).</li>
<li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+Helicobacter+pylori+infection+in+China+from+2014-2023%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Prevalence of Helicobacter pylori infection in China from 2014-2023: A systematic review and meta-analysis.</a> World J Gastroenterol. 30 (43), 4636-4656 (2024).</li>
<li>Chmiela, M., Karwowska, Z., Gonciarz, W., Allushi, B., Stączek, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+pathogen+interactions+in+Helicobacter+pylori-related+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Host pathogen interactions in Helicobacter pylori-related gastric cancer.</a> World J Gastroenterol. 23 (9), 1521-1540 (2017).</li>
<li>Dai, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+sensitive+assay+of+Helicobacter+pylori+with+one-tube+RPA-CRISPR%2FCas12+by+portable+array+detector+for+visible+analysis+of+thermostatic+nucleic+acid+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid and sensitive assay of Helicobacter pylori with one-tube RPA-CRISPR/Cas12 by portable array detector for visible analysis of thermostatic nucleic acid amplification.</a> Front Microbiol. 13, 858247(2022).</li>
<li>Zubillaga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MIN%C2%A014C+UBT%3A+a+combination+of+gastric+basal+transit+and+14C-urea+breath+test+for+the+detection+of+Helicobacter+pylori+infection+in+human+beings%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">MIN 14C UBT: a combination of gastric basal transit and 14C-urea breath test for the detection of Helicobacter pylori infection in human beings.</a> Nucl Med Biol. 24 (6), 565-569 (1997).</li>
<li>Bentur, Y., Matsui, D., Koren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+of+14C-UBT+for+diagnosis+of+Helicobacter+pylori+infection+in+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Can+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Safety of 14C-UBT for diagnosis of Helicobacter pylori infection in pregnancy.</a> Can Fam Physician. 55 (5), 479-480 (2009).</li>
<li>Herbrink, P., van Doorn, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serological+methods+for+diagnosis+of+Helicobacter+pylori+infection+and+monitoring+of+eradication+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Clin+Microbiol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Serological methods for diagnosis of Helicobacter pylori infection and monitoring of eradication therapy.</a> Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 19 (3), 164-173 (2000).</li>
<li>Laheij, R. J., Straatman, H., Jansen, J. B., Verbeek, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+commercially+available+Helicobacter+pylori+serology+kits%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of commercially available Helicobacter pylori serology kits: a review.</a> J Clin Microbiol. 36 (10), 2803-2809 (1998).</li>
<li>Wang, L., Li, Z., Tay, C. Y., Marshall, B. J., Gu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicentre%2C+cross-sectional+surveillance+of+Helicobacter+pylori+prevalence+and+antibiotic+resistance+to+clarithromycin+and+levofloxacin+in+urban+China+using+the+string+test+coupled+with+quantitative+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Microbe%22%5BJournal%5D)">Multicentre, cross-sectional surveillance of Helicobacter pylori prevalence and antibiotic resistance to clarithromycin and levofloxacin in urban China using the string test coupled with quantitative PCR.</a> Lancet Microbe. 5 (6), e512-e513 (2024).</li>
<li>Megraud, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helicobacter+pylori+resistance+to+antibiotics+in+Europe+in+2018+and+its+relationship+to+antibiotic+consumption+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Helicobacter pylori resistance to antibiotics in Europe in 2018 and its relationship to antibiotic consumption in the community.</a> Gut. 70 (10), 1815-1822 (2021).</li>
<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Cancer+Statistics+2020%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).</li>
</ol>

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

H. pylori stanowi jedną z najbardziej rozpowszechnionych infekcji bakteryjnych na całym świecie15. Wyniki kwestionariusza ujawniły, że 55,2% populacji nie miało świadomości na temat H. pylori, podczas gdy 90,8% uważało, że konieczne jest przeprowadzenie badań przesiewowych w kierunku H. pylori. Wyniki te podkreślają znaczenie wdrażania programów badań przesiewowych przeciwko H. pylori na obszarach znajdujących się w niekorzystnej sytuacji ekonomicznej i odległyc...

Helicobacter pylori (H. pylori, Hp) to mikroaerofilna, spiralna bakteria Gram-ujemna1. Ze względu na swoją zdolność do kolonizacji i przewlekłego infekowania ludzkiego żołądka2, patogen ten został zidentyfikowany jako główny czynnik etiologiczny w rozwoju gruczolakoraka żołądka 3,4. W 2015 roku ~4,4 miliarda ludzi na świecie cierpiało z powodu zakażenia H. pylori 5. Częstość występowania zakażenia H. pylori wykazuje znaczne zróżnicowanie geograficzne, przy czym kraje rozwijające się doświadczają znacznie wyższych wskaźników w porównaniu z krajami rozwiniętymi. Warto zauważyć, że w krajach o niskich dochodach i wśród niektórych wrażliwych populacji wskaźnik infekcji może sięgać nawet 75%6.
Chociaż tradycyjne metody wykrywania, takie jak gastroskopia, są dokładne, ich zastosowanie w badaniach przesiewowych na dużą skalę i rutynowych obserwacjach jest ograniczone ze względu na ich inwazyjność, wysoki koszt i niską akceptację pacjentów7. Dlatego poszukiwanie nieinwazyjnych, prostych i szybkich metod diagnostycznych stało się ważnym kierunkiem badań współczesnej medycyny klinicznej. Głównym celem nieinwazyjnej diagnostyki H. pylori jest dokładne, bezpieczne i wygodne wykrycie, czy pacjent jest zakażony H. pylori bez badania endoskopowego. Mocznikowy test oddechowy (UBT), test antygenu kałowego H. pylori (FAT)8 i test serologiczny9 są popularnymi technikami nieinwazyjnymi.
Wśród nich UBT jest najmniej inwazyjną i najdokładniejszą dostępną procedurą10. Czułość i swoistość UBT są wyższe niż 95%11. Spośród dostępnych nieinwazyjnych metod diagnostycznych wykazano, że UBT jest najdokładniejsza i najbardziej wiarygodna, jak wykazano w badaniu walidacyjnym przeprowadzonym w Iraku, UBT może być zalecany jako pierwszy wybór ze względu na jego wyższą skuteczność w porównaniu z innymi metodami12. Jednak UBT ma również swoje wady, takie jak wysoki koszt i potrzeba analizy spektrometrii mas, co ogranicza zastosowanie w warunkach zdalnych lub o ograniczonych zasobach13.
Opracowanie szybkiej, nieinwazyjnej i opłacalnej metody diagnostycznej wykrywania zakażenia H. pylori jest niezwykle potrzebne, szczególnie w regionach o ograniczonych zasobach. W tym badaniu opracowaliśmy technologię szybkiego wykrywania antygenu kałowego H. pylori w oparciu o technologię wykrywania kanapek z podwójnym przeciwciałem, która może szybko, skutecznie i tanio wykryć antygen H. pylori w próbkach kału. Technologia ta oferuje znaczące korzyści, w tym przystępność cenową, nieinwazyjność, łatwość obsługi i możliwość dostosowania do odległych obszarów. Stawiamy hipotezę, że metoda kanapkowa z podwójnym przeciwciałem do wykrywania antygenu kałowego H. pylori wykaże czułość i swoistość porównywalną z qPCR, pozycjonując ją jako realne narzędzie do nieinwazyjnej diagnozy klinicznej.
Kompleksowo omówiliśmy zasady, procedury, mocne strony metodologiczne i kliniczne zastosowanie wykrywania antygenu kałowego w przypadku zakażenia H. pylori . Aby potwierdzić jego praktyczność, przeprowadziliśmy dochodzenie epidemiologiczne i badania przesiewowe w wiosce Shitan w mieście Qingyuan w prowincji Guangdong w Chinach, która jest odległym i słabo rozwiniętym obszarem ze stałą populacją około 400 osób i ograniczonym poziomem wykształcenia. Nasze wyniki pokazują, że zaprojektowana tutaj technologia szybkiego wykrywania antygenu H. pylori w kale może być ukończona w ciągu 20 minut. Podkreśla się, że szybkie wykrycie antygenu H. pylori w kale jest potencjalnym i obiecującym narzędziem do szybkiej i wiarygodnej diagnozy zakażenia H. pylori na odległych i zacofanych obszarach.

<table><tbody><tr><td>Zestaw do ekstrakcji DNA</td><td>Jiangsu mole biotechnology co., ltd</td><td>20230223</td><td>Żaden</td></tr><tr><td>H. pylori zestaw do wykrywania antygenu kałowego</td><td>Hangzhou nuohui zdrowa technologia co., ltd</td><td>20213401126</td><td>Żaden</td></tr><tr><td>Zestaw do wykrywania kwasów nukleinowych H. pylori </td><td>Jiangsu mole biotechnology co., ltd</td><td>20230226</td><td>Żaden</td></tr><tr><td>Ilościowy PCR fluorescencji w czasie rzeczywistym</td><td>Szanghaj Hongshi technologia leczenia medycznego co., ltd</td><td>20183221659</td><td>Żaden</td></tr><tr><td>Statystyczne rozwiązania produktowe i usługowe</td><td>Firma IBM</td><td>Żaden</td><td>Żaden</td></tr></tbody></table>

szybkie wykrywanie antygenu kałowego zakażenia helicobacter pylori w oparciu o technologię wykrywania kanapek z podwójnym przeciwciałem

Rapid Detection of Fecal Antigen of Helicobacter pylori Infection Based on Double Antibody Sandwich Detection Technology

Helicobacter pylori może być pasożytniczy w błonie śluzowej żołądka, co może powodować szereg chorób żołądkowo-jelitowych po zakażeniu i jest ściśle związane z zapaleniem żołądka, wrzodem żołądka i rakiem żołądka. Wysokie rozpowszechnienie zakażenia H. pylori w regionach o słabej infrastrukturze medycznej i nieodpowiednich obszarach sanitarnych pozostaje poważnym problemem dla zdrowia publicznego. W związku z tym opracowanie szybkich, prostych i opłacalnych metod badań przesiewowych w celu wykrywania H. pylori w warunkach ograniczonych zasobów ma ogromne znaczenie.
W tym badaniu przeprowadziliśmy badania przesiewowe w społeczności w wiosce Shitan w prowincji Guangdong, odległym i słabo rozwiniętym obszarze charakteryzującym się stałą populacją około 300 mieszkańców o ogólnie niskim poziomie wykształcenia. Zastosowaliśmy test kanapkowy z podwójnym przeciwciałem do wykrywania antygenu kałowego H. pylori , metody wybranej ze względu na jej potencjalne zastosowanie w warunkach o niskich zasobach. W sumie zapisano 261 uczestników z wioski, a ich próbki kału zostały przeanalizowane przy użyciu tej techniki. W celu walidacji porównawczej te same próbki poddano ilościowej analizie łańcuchowej reakcji polimerazy (qPCR). W porównaniu z wynikami qPCR czułość i swoistość wykrywania antygenu H. pylori w kale wynosiły 60,24% i 80,08%. Wyniki wykazały silną zgodność między metodą wykrywania antygenu kałowego a qPCR (Kappa = 0,630). W badaniu tym systematycznie wyjaśniono zasady, procedury, metodologie i zastosowania kliniczne wykrywania antygenu kałowego w przypadku zakażenia H. pylori , mając na celu zbadanie technologii kanapek z podwójnym przeciwciałem na bazie lateksu oraz ustanowienie nowych strategii i praktycznych wytycznych dotyczących jej pomocniczej diagnozy.

Badanie ankietowe 
Do badania zakwalifikowano łącznie 261 uczestników, w tym 144 kobiety i 117 mężczyzn, w wieku od 4 do 99 lat. Średni wiek badanych wynosił 48,30 ± 17,61 lat. W grupie znajdowało się 17 osób niepełnoletnich (0-17 lat), 202 dorosłych (18-64 lata) oraz 42 uczestników w wieku starszym (&gt;64 lata). Wyniki ankiety przedstawiono w Tabeli 1. Większość (90,8%) badanych uważała, że przeprowadzenie przesiewowego badania w kierunku H. pylori jest konieczne.
<p cl...

W tym badaniu opracowano technikę wykrywania kanapek opartą na podwójnych przeciwciałach w celu szybkiego wykrywania antygenów kałowych zakażonych Helicobacter pylori.

Szybkie wykrywanie antygenu kałowego zakażenia Helicobacter pylori w oparciu o technologię wykrywania kanapek z podwójnym przeciwciałem

Helicobacter pylori can be parasitic in gastric mucosa, which can cause a series of gastrointestinal diseases after infection and is closely related to ...

Naszym zakresem badawczym jest technologia detekcji Helicobacter pylori. Pytanie, na które chcemy odpowiedzieć, to dość prosta procedura, metoda i kliniczne zastosowanie wykrywania antygenu kałowego Helicobacter pylori. Nowe technologie, które promują rozwój tej dziedziny, takie jak ilościowy PCR fluorescencji w czasie rzeczywistym, wykrywanie CRISPR-Cas oraz bioczujniki i nanotechnologia. Zaletą tej technologii jest nieinwazyjna, niska cena i łatwa obsługa. Zaletą naszego schematu jest to, że nadaje się do badań przesiewowych w obszarach zacofanych i słabo rozwiniętych. Szybkie wykrywanie antygenu H. pylori w kale jest potencjalnym i obiecującym narzędziem do szybkiej i wiarygodnej diagnozy zakażenia H. pylori na odległych i zaściankowych obszarach.[Narrator] Przed badaniem należy doprowadzić zarówno schłodzone, jak i zamrożone próbki do temperatury pokojowej. Umieść probówkę na stanowisku testowym. Weź pojemnik na próbkę kału i wyjmij pręt do pobierania próbek. Włóż pręt do pobierania próbek w pięć różnych obszarów stołka, upewniając się, że gwintowany koniec jest całkowicie zanurzony w każdej pozycji. Po zakończeniu pobierania próbek włóż pręt do pobierania próbek z powrotem do probówki z odczynnikiem, upewniając się, że całkowita objętość pobranej próbki wynosi około 5 do 50 miligramów. Potrząsaj probówką z odczynnikiem na boki przez około 10 sekund, aby dokładnie wymieszać próbkę kału w rozcieńczalniku. Otwórz białą pokrywę probówki z odczynnikiem i trzymaj probówkę w pozycji pionowej. Całkowicie dociśnij nasadkę, aby zwolnić sample na karcie testowej. Pozwól próbce przepłynąć przez obszar wykrywania oznaczony T i obszar kontroli jakości oznaczony C, z których oba są pokryte mysim przeciwciałem przeciwko Helicobacter pylori. Jeśli antygen jest obecny, odczekaj od 10 do 20 minut, aby umożliwić utworzenie reakcji chromogennej w obszarze wykrywania. Obserwuj obecność lub brak kolorowych linii w obszarach testowych i kontrolnych. Porównaj wynik z kolorową kartą, aby określić stężenie antygenu Helicobacter pylori. Po eksperymencie przechowuj próbkę w temperaturze od dwóch do ośmiu stopni Celsjusza przez maksymalnie 72 godziny. Spośród wyników antygenu Helicobacter pylori w kale u 261 osób, 52 były dodatnie, a 209 negatywne. Spośród wyników qPCR z kałem 261 osób, 83 były pozytywne, a 178 negatywne. Dodatni wskaźnik w wiosce Shitan wyniósł 19,92%, czyli nieco mniej niż krajowy wskaźnik dodatni wynoszący 42,8%.

rapid-detection-fecal-antigen-helicobacter-pylori-infection-based-on

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Protokół przedstawia nieinwazyjną metodę szybkiego diagnozowania zakażeń żołądka Helicobacter pylori za pomocą testu sznurkowego oraz określa jego oporność antybiotykową na klarytromycynę i lewofloksacynę za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy (qPCR).

Szybka diagnostyka reakcji łańcuchowej opartej na ilościowej reakcji polimerazy (qPCR) w przypadku zakażenia Helicobacter pylori i oporności na antybiotyki

Szybka i dokładna metoda wykrywania H. pylori i testowania oporności na leki jest bardzo ważna dla skutecznego zwalczania H. pylori w praktyce klinicznej. Protokół ten ma na celu przedstawienie specyficznej metodologii obejmującej ilościową reakcję łańcuchową polimerazy błony śluzowej żołądka (qPCR) w celu szybkiego wykrywania H. pylori i oporności na antybiotyki.

Ilościowa analiza reakcji łańcuchowej polimerazy błony śluzowej żołądka w celu wykrycia Helicobacter pylori i oporności na antybiotyki

Protokół wykorzystuje nieinwazyjne pobieranie próbek kału w połączeniu z ilościową reakcją łańcuchową polimerazy, aby zaoferować wygodną i szybką metodę diagnostyczną infekcji Helicobacter pylori i jej odporności na klarytromycynę i chinolony.

Wykrywanie zakażenia Helicobacter pylori i oporności na antybiotyki za pomocą ilościowej analizy reakcji łańcuchowej polimerazy w stolcu

Wśród licznych metod diagnostycznych dla Helicobacter pylori, immunofluorescencja kropek kwantowych może szybko wytypować i wykryć Helicobacter pylori, stanowiąc podstawę do podejmowania decyzji o leczeniu klinicznym. Niniejszy artykuł zawiera szczegółowe wprowadzenie do wartości aplikacyjnej technologii kropek kwantowych w typowaniu i wykrywaniu Helicobacter pylori.

Szybkie wykrywanie zjadliwości Helicobacter pylori i typowanie przy użyciu technologii znakowania kropkami kwantowymi

Niniejszy protokół opisuje prostą metodę opartą na zastosowaniu taśmy klejącej do pobierania próbek z powierzchni pomidorów oraz innych świeżych produktów rolnych, a następnie szybką detekcję całych komórek Salmonella przy użyciu fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ (FISH).

Połączenie pobierania próbek za pomocą taśmy klejącej i fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ w celu szybkiego wykrywania Salmonella na świeżych produktach rolnych

Przedstawiono szybki i dokładny test typu point-of-care w kierunku inwazyjnej aspergilozy płucnej. Wykorzystuje on technologię przepływu bocznego z zastosowaniem specyficznego przeciwciała monoklonalnego, które wiąże antygen Aspergillus wydzielany podczas infekcji płucnych. Analiza jest kompatybilna z surowicą oraz płuczynami z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego i stanowi nowy test pomocniczy w diagnostyce choroby.

Wykrywanie inwazyjnej aspergilozy płuc u pacjentów z nowotworami hematologicznymi z wykorzystaniem technologii przepływu bocznego

Tutaj opisujemy dwa testy do pomiaru aktywacji dopełniacza indukowanej przez przeciwciała przeciwko czerwonym krwinkom. Główną przewagą nad obecnymi testami jest ich ilościowy i łatwy w interpretacji charakter.

Metody ilościowego wykrywania indukowanej przez przeciwciała aktywacji dopełniacza na krwinkach czerwonych

Nienaruszone kompleksy HLA/peptydowe klasy I są wydalane przez komórki rakowe, co stanowi potencjalnie istotny biomarker raka. Wykorzystując technologię czujników bezznacznikowych i przeciwciała monoklonalne naśladujące receptor limfocytów T, demonstrowano wykrywanie wydalanych kompleksów MIF/HLA-A*02:01 w supernatantach komórkowych MDA-MB-231, wzbogaconej surowicy ludzkiej i osoczu pacjenta, co umożliwiło opracowanie nowej platformy diagnostycznej raka.

Wykrywanie biomarkerów ludzkiego antygenu leukocytów w raku piersi z wykorzystaniem technologii biosensorów bez znaczników

Opisujemy szybki, molekularny test na grypę A i B. Test grypy wykrywa każdy cel w ciągu 15 minut, stosując amplifikację izotermiczną za pomocą starterów specyficznych dla grypy, a następnie wykrywanie celu za pomocą molekularnych sond ostrzegawczych. Test na grypę A i B jest przyjazny dla użytkownika i wymaga minimalnego czasu na wykonanie.

Szybkie wykrywanie molekularne i różnicowanie wirusów grypy A i B

Tutaj prezentujemy protokół opisujący prostą, szybką i efektywną technikę wzmacniania prionów, metodę konwersji indukowanej wstrząsami w czasie rzeczywistym (RT-QuIC).

Test konwersji wywołany wstrząsem w czasie rzeczywistym do wykrywania prionów CWD w materiale kałowym

Poznaj szybką metodę wykrywania antygenu kałowego Helicobacter pylori opartą na technologii kanapki z podwójnym przeciwciałem. To podejście zwiększa czułość i swoistość diagnostyki.

Szybkie wykrywanie antygenu kałowego zakażenia Helicobacter pylori w oparciu o technologię wykrywania kanapek z podwójnym przeciwciałem (Wideo) | JoVE Journal

Szybkie wykrywanie antygenu kałowego zakażenia Helicobacter pylori w oparciu o technologię wykrywania kanapek z podwójnym przeciwciałem

Przeglądaj więcej filmów