Name: Automatyzacja implantacji guzów w larwach danio dano młodego dla badań i medycyny nowotworowej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Poznaj automatyczną metodę implantacji ksenograftów nowotworowych u larw Danio rerio przy użyciu systemu robotycznego. Protokół ten umożliwia niezawodne podawanie leków i testowanie skuteczności terapii przeciwnowotworowej in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Serdecznie dziękujemy programowi Eurostars za wsparcie naszych badań poprzez grant ROBO-FISH (numer grantu: E! 114899) oraz program EIC-PATHFINDER poprzez grant ALADDIN (numer grantu: 101130574).

<ol><li>Goetz, L. H., Schork, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+medicine%3A+motivation%2C+challenges%2C+and+progress%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Personalized medicine: motivation, challenges, and progress.</a> Fertil Steril. 109 (6), 952-963 (2018).</li>
<li>Jorgensen, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twenty+years+with+personalized+medicine%3A+Past%2C+present%2C+and+future+of+individualized+pharmacotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Twenty years with personalized medicine: Past, present, and future of individualized pharmacotherapy.</a> Oncologist. 24 (7), e432-e440 (2019).</li>
<li>Ashley, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Towards precision medicine.</a> Nat Rev Genet. 17 (19), 507-522 (2016).</li>
<li>Binotto, M., Reinert, T., Werutsky, G., Zaffaroni, F., Schwartsmann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Health-related+quality+of+life+before+and+during+chemotherapy+in+patients+with+early-stage+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ecancermedicalscience%22%5BJournal%5D)">Health-related quality of life before and during chemotherapy in patients with early-stage breast cancer.</a> Ecancermedicalscience. 14, 1007(2020).</li>
<li>Nalla, L. V., Kanukolanu, A., Yeduvaka, M., Gajula, S. N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+in+single-cell+proteomics+and+mass+spectrometry-based+techniques+for+unmasking+cellular+diversity+in+triple+negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics+Clin+Appl%22%5BJournal%5D)">Advancements in single-cell proteomics and mass spectrometry-based techniques for unmasking cellular diversity in triple negative breast cancer.</a> Proteomics Clin Appl. 19 (1), e202400101(2025).</li>
<li>Lindahl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+tumour+xenograft+models%3A+a+prognostic+approach+to+epithelial+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Precis+Oncol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish tumour xenograft models: a prognostic approach to epithelial ovarian cancer.</a> NPJ Precis Oncol. 8 (1), 53(2024).</li>
<li>Duan, X. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+clinical+trial+design+in+precision+medicine%3A+discovery%2C+development+and+direction%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">New clinical trial design in precision medicine: discovery, development and direction.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 57(2024).</li>
<li>Research and development in the pharmaceutical industry. , Congressional Budget Office. 
 <a target="_blank" href="https://www.cbo.gov/publication/57126">https://www.cbo.gov/publication/57126</a> (2021).</li>
<li>Dusetzina, S. B., Oberlander, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+price+of+progress%3A+Managing+prescription+drug+spending%5BTitle%5D)+AND+%22J+Health+Polit+Policy+Law%22%5BJournal%5D)">The price of progress: Managing prescription drug spending.</a> J Health Polit Policy Law. 47 (6), 621-628 (2022).</li>
<li>Nagar, S., Rand, L. Z., Kesselheim, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+should+US+policymakers+learn+from+international+drug+pricing+transparency+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22AMA+J+Ethics%22%5BJournal%5D)">What should US policymakers learn from international drug pricing transparency strategies.</a> AMA J Ethics. 24 (11), E1083-E1090 (2022).</li>
<li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+intelligence+in+cancer+target+identification+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Artificial intelligence in cancer target identification and drug discovery.</a> Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 156(2022).</li>
<li>Costa, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Avatar-test+forecasts+clinical+response+to+chemotherapy+in+patients+with+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Avatar-test forecasts clinical response to chemotherapy in patients with colorectal cancer.</a> Nat Commun. 15 (1), 4771(2024).</li>
<li>Ali, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+patient-derived+xenograft+models+predict+lymph+node+involvement+and+treatment+outcome+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish patient-derived xenograft models predict lymph node involvement and treatment outcome in non-small cell lung cancer.</a> J Exp Clin Cancer Res. 41 (1), 58(2022).</li>
<li>Rouhi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-induced+metastasis+model+in+embryonic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-induced metastasis model in embryonic zebrafish.</a> Nat Protoc. 5 (12), 1911-1918 (2010).</li>
<li>Grissenberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-content+drug+screening+in+zebrafish+xenografts+reveals+high+efficacy+of+dual+MCL-1%2FBCL-X%28L%29+inhibition+against+Ewing+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">High-content drug screening in zebrafish xenografts reveals high efficacy of dual MCL-1/BCL-X(L) inhibition against Ewing sarcoma.</a> Cancer Lett. 554, 216028(2023).</li>
<li>Pascoal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+zebrafish+larvae+as+a+xenotransplantation+model+to+study+Ewing+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Using zebrafish larvae as a xenotransplantation model to study Ewing sarcoma.</a> Methods Mol Biol. 2226, 243-255 (2021).</li>
<li>Costa, B., Estrada, M. F., Mendes, R. V., Fior, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+avatars+towards+personalized+medicine-A+comparative+review+between+avatar+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Zebrafish avatars towards personalized medicine-A comparative review between avatar models.</a> Cells. 9 (2), 293(2020).</li>
<li>Costa, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Avatars+of+rectal+cancer+patients+validate+the+radiosensitive+effect+of+metformin%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Avatars of rectal cancer patients validate the radiosensitive effect of metformin.</a> Front Oncol. 12, 862889(2022).</li>
<li>Tavares Barroso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+pancreatobiliary+cancer+zebrafish+avatars+for+chemotherapy+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Establishment of pancreatobiliary cancer zebrafish avatars for chemotherapy screening.</a> Cells. 10 (8), 2077(2021).</li>
<li>Holland, I., Davies, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automation+in+the+life+science+research+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Automation in the life science research laboratory.</a> Front Bioeng Biotechnol. 8, 571777(2020).</li>
<li>Brito, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+to+enhance+rigor+and+reproducibility+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Gigascience%22%5BJournal%5D)">Recommendations to enhance rigor and reproducibility in biomedical research.</a> Gigascience. 9 (6), giaa056(2020).</li>
<li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+microinjection+for+zebrafish+xenograft+models%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Biomed+Innov%22%5BJournal%5D)">Automated microinjection for zebrafish xenograft models.</a> NPJ Biomed Innov. 2, 13(2025).</li>
<li>Progatzky, F., Dallman, M. J., Lo Celso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+seeing+to+believing%3A+labelling+strategies+for+in+vivo+cell-tracking+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Interface+Focus%22%5BJournal%5D)">From seeing to believing: labelling strategies for in vivo cell-tracking experiments.</a> Interface Focus. 3 (3), 20130001(2013).</li>
<li>Martinez-Lopez, M., Povoa, V., Fior, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+zebrafish+larval+xenografts+and+tumor+behavior+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of zebrafish larval xenografts and tumor behavior analysis.</a> J Vis Exp. (172), e62373(2021).</li>
<li>Groenewoud, A., Yin, J., Snaar-Jagalska, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ortho-+and+ectopic+zebrafish+xeno-engraftment+of+ocular+melanoma+to+recapitulate+primary+tumor+and+experimental+metastasis+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ortho- and ectopic zebrafish xeno-engraftment of ocular melanoma to recapitulate primary tumor and experimental metastasis development.</a> J Vis Exp. (175), e62356(2021).</li>
<li>Ren, J., Liu, S., Cui, C., Ten Dijke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasive+behavior+of+human+breast+cancer+cells+in+embryonic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Invasive behavior of human breast cancer cells in embryonic zebrafish.</a> J Vis Exp. (122), e55459(2017).</li>
</ol>

Y.D., K.J.v.d.K. i J.d.S. pracują dla Life Science Methods, które komercyjnie wykorzystuje system robotyczny używany w tej publikacji. Pozostali autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Rozwój i wdrożenie automatycznego wtryskiwacza stanowią istotny postęp w dziedzinie ksenoprzeszczepienia guzów danio pręgowanego w badaniach leków przeciwnowotworowych i medycynie precyzyjnej. Jest to, według naszej najlepszej wiedzy, pierwszy komercyjnie dostępny robot do automatycznego wstrzykiwania zawiesin komórkowych do larw danio pręgowanych, dlatego protokół ten jest istotny dla wszystkich badań związanych z takimi wstrzykiwaniami o wysokiej wydajności. Dzięki automatyzacji procesu wstrzykiwania system ten dodatko...

<a href="https://app.jove.com/t/6653">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/68441">10.3791/68441</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/68441">Automating Tumor Implantation in Zebrafish Larvae for Cancer Research and Medicine</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Automating Tumor Implantation in Zebrafish Larvae for Cancer Research and Medicine

W miarę jak nasze rozumienie zachowań onkologicznych i oporności na leki się rozwija, coraz wyraźniej staje się potrzeba lepszej diagnozy, charakteryzacji i terapeutycznego celowania podtypów nowotworów. W ciągu ostatnich dwudziestu lat liczba publikacji z zakresu medycyny spersonalizowanej (znanej również jako medycyna precyzyjna) wzrosłao 1,2. Rzeczywiście, medycyna precyzyjna definiowana jest jako praktyka dostosowywania leczenia medycznego do cech choroby konkretnego pacjenta3. Jest to zgodne z naszym obecnym rozumieniem, że nie istnieje podejście typu "jeden lek dla wszystkich", co stało się szczególnie jasne i istotne w terapii nowotworów. Obecnie jednak brak klinicznie istotnych podejść do medycyny precyzyjnej dla większości pacjentów onkologicznych sprawia, że wybór najodpowiedniejszej strategii leczenia odbywa się metodą prób i błędów. Powoduje to znaczne opóźnienia i niepotrzebny dyskomfort, pogorszenie jakości życia i skrócenie przeżycia. Co ważne, pacjent z obniżoną jakością życia po kilku nieskutecznych schematach chemioterapii może zdecydować się na leczenie paliatywne4. Dzięki odpowiedniej, spersonalizowanej metodzie przesiewowej wybór leku może być przeprowadzany z większą precyzją i bez opóźnień. Chociaż możliwe jest przeprowadzenie sekwencjonowania genetycznego i proteomicznego na komórkach nowotworowych5, takie dane molekularne są ogólnie słabo przewidujące wyniki leczenia i często mają niewielką wartość kliniczną6. W rozwoju leków jak najwcześniejsze zastosowanie precyzyjnego podejścia medycyny znacznie zwiększa wskaźniki sukcesu na różnych etapach rozwoju leków. Rzeczywiście, wczesne zrozumienie, które kandydaty na leki mają najszerszy profil skuteczności międzyindywidualnej lub które podtypy nowotworów są szczególnie wrażliwe na każdego z nich, zmniejsza ryzyko i poprawia efektywność późnych testów przedklinicznych i badań klinicznych7. Wraz ze wzrostem kosztów badań i rozwoju farmaceutycznego8, rosnącą presją polityczną na obniżenie cen leków 9,10 oraz postępem w walidacji celów opartych na AI11, potrzeba szeroko zakrojonej, efektywnej i precyzyjnej metody przesiewowej w rozwoju leków nigdy wcześniej nie była większa.
Tutaj pojawiają się danio danio, a konkretnie larwy danio pręgowanego po 48 godzinach po zapłodnieniu (hpf). Modele ksenoprzeszczepów nowotworowych oparte na larwach danio pręgowanych jako gospodarzach stanowią szybką platformę przesiewową in vivo do prognozowania odpowiedzi klinicznych na chemioterapię 6,12,13,14. Modele ksenotransplanttu guza danio ruszowanego stały się potężną alternatywą zarówno dla medycyny precyzyjnej molekularnej (czyli genomiki lub patologii molekularnej do wyboru leczenia pacjentów onkologicznych), jak i badań organoidów i ksenotransplanttów myszy w przedklinicznym rozwoju leków15,16. W ksenoprzecie nowotworów danio pręgowanego fluorescencyjne komórki nowotworowe (znakowane genetycznie lub chemicznie) są przeszczepiane w larwy danio pręgowanego z wysoką efektywnością13. Leki lub kandydaci na leki o stosunkowo szybkim sposobie działania (np. takie, które bezpośrednio lub pośrednio celują w żywotność komórek nowotworowych, na przykład poprzez aktywację cytotoksyczności limfocytorycznych T) mogą być następnie przesiewane w ciągu zaledwie trzech dni, co prowadzi do szybkich, funkcjonalnych wyników skuteczności leków przeciwnowotworowych i przeciwprzerzutowych. Następnie można dokonać świadomego wyboru terapii, która wykazuje dobrą skuteczność, a badania pokazują, że powinno to przekładać się na silny wynik leczenia dla pacjenta lub szansę powodzenia w projektach rozwoju leków odpowiednio12, 17, 18, 19. Ponadto ten proces przesiewowy jest niezwykle istotny przy wyborze związków, które zostaną przesunięte do rozwoju leków.
Aby jednak model ksenograftu nowotworowego danio pręgowanego (ZTX) stał się skutecznym narzędziem diagnostycznym w warunkach klinicznych i umożliwił przeprowadzanie szeroko zakrojonych badań nad lekami oraz umożliwić przeprowadzenie badań leków na podstawie badań nad nowotworem (ZTX), model nowotworowego ksenograftu danio pręgowanego (ZTX) musi być szybki, niezawodny, powtarzalny i opłacalny. Automatyzacja jest niezbędna do osiągnięcia tych celów, ponieważ minimalizuje zmienność operatora, jednocześnie zwiększając przepustowość i poprawiając precyzję w iniekcjach i analizie komórek nowotworowych. Standaryzując te procedury, możemy poprawić powtarzalność danych i wyeliminować błędy ludzkie, a zautomatyzowane procesy stwarzają możliwości przesiewania o wysokiej przepustowości i umożliwiania badań na dużą skalę20,21. Ostatnio opracowaliśmy zautomatyzowany wtryskiwacz, który wstrzykuje ciecze, cząstki lub komórki różnego pochodzenia w trzech różnych miejscach anatomicznych z taką samą lub większą szybkością, precyzją i powtarzalnością niż wykwalifikowani badacze danio majonaprzód 22. Przedstawiamy tutaj protokół automatycznego wstrzykiwania komórek nowotworowych do larw danio wpatrzonego w precyzyjny i kontrolowany sposób. Dzięki zaawansowanemu rozpoznawaniu obrazów larwy danio pręgowanego są lokalizowane na płycie wstrzykującej, ustala się orientację i wytyczono miejsce docelowe do wstrzyknięcia. Następnie igła jest automatycznie prowadzona, a skuteczne nakłucie jest ustalane przez oprogramowanie. Przy minimalnym szkoleniu operatorzy mogą wykorzystywać ten system do wykonywania złożonych zastrzyków, na przykład tworzenia mikroguzów u żywych larw danio pręgowanych, co umożliwia efektywne badanie strategii leczenia.

<table><tbody><tr><td>6-dołkowa płyta&nbsp;</td><td>Greiner bio-one cellstar&nbsp;</td><td>ref 657160</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>VWR</td><td>#N605-100G</td><td></td></tr><tr><td>Zautomatyzowany system wtrysku + materiały eksploatacyjne</td><td>Metody nauk przyrodniczych</td><td>https://www.lifesciencemethods.com/microinjection_system_for_zebrafish_larvae.html?nocache=1752058717774</td><td></td></tr><tr><td>Naczynia włosowate szkła borosilikatowego</td><td>Światowe Precyzyjne Instrumenty</td><td>Nie ma</td><td>1,0 mm średnica średnicy, 0,78 mm średnica</td></tr><tr><td>Licznik komórek&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>Hrabina 3</td><td></td></tr><tr><td>Igły komercyjne&nbsp;</td><td>Clunbury Scientific LLC</td><td>&nbsp;#B100-58-20</td><td></td></tr><tr><td>DNaza typu I&nbsp;</td><td>Roche</td><td>#11284932001</td><td></td></tr><tr><td>Filtr komórek nowotworowych</td><td>Sysmex CellTricsTM</td><td>04-0042-2316</td><td>30 & mikro; m</td></tr><tr><td>Olej mineralny&nbsp;</td><td>Diapharma</td><td>&nbsp;#330779-1L</td><td></td></tr><tr><td>Szlifierka igiełkowa ()</td><td>Narishige &nbsp;</td><td>&nbsp; EG-401</td><td></td></tr><tr><td>Poliwinylpirrolidon 40</td><td>Sigma</td><td>#102420477</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS Octo Dissociator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>https://www.miltenyibiotec.com/US-en/products/gentlemacs-octo-dissociator-with-heaters.html</td><td></td></tr></tbody></table>

automatyzacja implantacji guzów w larwach danio dano młodego dla badań i medycyny nowotworowej

Automating Tumor Implantation in Zebrafish Larvae for Cancer Research and Medicine

Zastrzyki z larw danio pręgowanych, w tym ksenoprzeszczepienie guzów podskórnych i ortotopowych mózgu oraz dożylne podawanie leków, stały się kluczowymi technikami badań nad danio pręgowanymi. Procedury te jednak pozostają żmudne, technicznie wymagające i silnie zależne od umiejętności operatora, ograniczając przepustowość i powtarzalność. Aby rozwiązać te ograniczenia, wprowadzamy zaawansowany system robotyczny, który automatyzuje mikrozastrzyki w larwy danio pręgowanego, znacząco poprawiając wydajność, precyzję i powtarzalność w porównaniu do ręcznych wstrzykiwań. Przedstawiamy szczegółowy protokół obsługi automatycznego wtryskiwacza, systemu o wysokiej przepustowości zdolnym do dostarczania cieczy, cząstek lub komórek nowotworowych w trzech różnych miejscach anatomicznych z wyższą dokładnością i szybkością niż wykwalifikowani badacze danio danio. Przedstawiamy kluczowe kroki, w tym konfigurację, kalibrację, procedury wstrzykiwania oraz rozwiązywanie problemów, aby zapewnić optymalną wydajność. Ponadto przedstawiamy reprezentatywne przykłady wyników pracy z robotem oraz omawiamy jego potencjał do ułatwiania zastrzyków larwalnych na dużą skalę, w tym do badań lekowych i medycyny precyzyjnej. Integrując zautomatyzowany wstrzykiwacz z przepływem pracy, naukowcy mogą przezwyciężyć ograniczenia manualnych zastrzyków i przyspieszyć przedkliniczne odkrywanie leków oraz spersonalizowany wybór leczenia.

Przedstawiamy tutaj zautomatyzowany proces wstrzykiwania dla trzech najczęściej używanych miejsc wstrzykiwania dla ksengraftów komórek nowotworowych.
Film 1 demonstruje automatyczne wstrzykiwanie przewodu Cuviera (DoC) za pomocą systemu robotycznego. Robot najpierw systematycznie skanuje płytę, przesuwając się od góry do dołu i od lewej do prawej, aby zlokalizować larwę danio. Po zidentyfikowaniu larwy igła automatycznie się do niej zbliża, dostosowując się do ustalonej pozycj...

Przedstawiamy tutaj szczegółowy protokół automatycznego wszczepiania ksenoprzeszczepu nowotworowego larwam danio pręgowanego za pomocą nowoczesnego robotycznego systemu iniekcji. Ponadto prezentujemy filmy z iniekcjami oraz dane walidacyjne pokazujące skuteczną wydajność systemu.

Automatyzacja implantacji guzów w larwach danio dano młodego dla badań i medycyny nowotworowej

Zebrafish larval injections, including subcutaneous and brain-orthotopic tumor xenografting as well as intravenous drug administration, have become ...

Personalizacja leczenia jest kluczowa dla poprawy przeżycia po raku. Ponieważ obecna medycyna precyzyjna nie potrafi spersonalizować leczenia dla większości pacjentów, jak można wykorzystać nowe metody funkcjonalne, aby sprostać temu wyzwaniu? Aby ułatwić automatyzację przeszczepów Massimo i powiązanych technik, w tym podawania leków w tylnej części mózgu, podskórnej lub dożylnie, oferujemy szczegółowy protokół stosowania zautomatyzowanego systemu iniekcji.Protokół ten pozwoli podstawowym badaczom i laboratoriom klinicznym niezawodnie tworzyć danio na podstawie modeli przeszczepów Massimo oraz stosować dożylne podawanie leków w celu funkcjonalnego testowania skuteczności leków przeciwnowotworowych in vivo. Na początek zwilż płytkę żelu agarozowego roztworem E3. Trzymaj płytkę pod kątem, aby nadmiar roztworu E3 się zbierał i zbierał.Ostrożnie umieść 10 do 20 znieczulonych larw na zwilżonej płycie i pozwól, by nadmiar wody naturalnie odpłynął. Następnie ułóż larwy tak, aby były równomiernie rozmieszczone i nie stykały się ze sobą, zachowując minimalną odległość 10 milimetrów od krawędzi płytki. Teraz użyj pipety lub chłonnego papieru, aby usunąć nadmiar płynu z płytki, jednocześnie d

automating-tumor-implantation-zebrafish-larvae-for-cancer-research

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Badania nad rakiem

Ten film opisuje test ksenoprzeszczepu danio pręgowanego w celu oceny powstawania nowotworów in vivo i zbadania efektu środków terapeutycznych.

Test ksenoprzeszczepu danio pręgowanego: metoda oceny skuteczności przeciwnowotworowej leków na rakotwórczość u danio pręgowanego in vivo

Ten film demonstruje ortotopową transplantację komórek guza mózgu danio pręgowanego do czwartej komory zarodka gengenożera immunokompetentnego. Procedura ta pozwala na długoterminowe badanie inwazji i zachowania komórek nowotworowych.

Długoterminowe ortotopowe przeszczepianie komórek nowotworowych do zarodków danio pręgowanego: skuteczna metoda dostarczania komórek nowotworowych do czwartej komory zarodków danio pręgowanego w celu długoterminowej analizy zachowania komórek nowotworowych

Przeszczepianie komórek nowotworowych jest ważnym narzędziem do identyfikacji mechanizmów nowotworowych i odpowiedzi terapeutycznych. Obecne techniki opierają się na zwierzętach niekompetentnych immunologicznie. W tym miejscu opisujemy metodę przeszczepiania komórek nowotworowych danio pręgowanego do zarodków kompetentnych immunologicznie w celu długoterminowej analizy zachowania komórek nowotworowych i odpowiedzi na leki in vivo.

Przeszczepianie pediatrycznych guzów mózgu danio pręgowanego do gospodarzy kompetentnych immunologicznie w celu długoterminowego badania zachowania komórek nowotworowych i odpowiedzi na leki

Mikroiniekcja zarodków i larw danio pręgowanego jest kluczową, ale wymagającą techniką stosowaną w wielu modelach danio pręgowanego. W tym miejscu przedstawiamy szereg narzędzi w mikroskali, które pomagają w stabilizacji i orientacji danio pręgowanego zarówno do mikroiniekcji, jak i obrazowania.

Urządzenia mikrostrukturalne do zoptymalizowanej mikroiniekcji i obrazowania larw danio pręgowanego

Tutaj prezentujemy protokół projektowania i produkcji szablonu do układania zarodków danio pręgowanego, a następnie szczegółową procedurę użycia takiego szablonu do wysokowydajnego układania zarodków danio pręgowanego na 96-dołkowej płytce.

Drukowany w 3 wymiarach (3D) szablon do wysokowydajnego układania zarodków danio pręgowanego

Celem tej metody jest wygenerowanie in vivo modelu angiogenezy guza poprzez ksenografowanie komórek nowotworowych ssaków do zarodka danio pręgowanego, który ma fluorescencyjnie znakowane naczynia krwionośne. Obrazując ksenoprzeszczep i związane z nim naczynia, można uzyskać ilościowy pomiar odpowiedzi angiogennej.

Obrazowanie in vivo i kwantyfikacja odpowiedzi angiogennej gospodarza w ksenoprzeszczepach guza danio pręgowanego

Modele ksenoprzeszczepów danio pręgowanego pozwalają na wysokoprzepustowe badania przesiewowe leków i obrazowanie fluorescencyjne ludzkich komórek nowotworowych w mikrośrodowisku in vivo. Opracowaliśmy przepływ pracy do zautomatyzowanych badań przesiewowych leków na dużą skalę na próbkach białaczki pobranych od pacjentów u danio pręgowanego przy użyciu zautomatyzowanego urządzenia do obrazowania wyposażonego w mikroskop fluorescencyjny.

Badania przesiewowe leków w ksenoprzeszczepach nowotworowych pochodzących od pacjenta pręgowanego

Tutaj udostępniamy protokół krok po kroku, z poradami dotyczącymi generowania ksenoprzeszczepów i wytycznymi do analizy zachowania guza, immunofluorescencji całego montażu i kwantyfikacji obrazowania konfokalnego.

Generowanie ksenoprzeszczepów larw danio pręgowanego i analiza zachowania guza

Opisujemy protokół ksenotransplantacji do żółtka przezroczystych zarodków danio pręgowanego, który jest zoptymalizowany za pomocą prostej, szybkiej metody oceny poziomu. Analizy po wstrzyknięciu obejmują przeżycie i ocenę obciążenia chorobowego ksenoprzeszczepionymi komórkami za pomocą cytometrii przepływowej.

Prosta, szybka i skuteczna metoda analizy ksenotransplantacji guza w przezroczystych zarodkach danio pręgowanego

Ten protokół pokazuje, jak generować fluorescencyjnie oznaczone, genetycznie zdefiniowane guzy klonalne w oku/czułkach Drosophila imaginal discs (EAD). Opisuje, jak rozdzielić EAD i mózg od larw trzeciego stadium rozwojowego i jak je przetworzyć w celu wizualizacji i ilościowego określenia zmian ekspresji genów i inwazyjności guza.

Model guza dysku imaginalnego Drosophila: wizualizacja i kwantyfikacja ekspresji genów i inwazyjności guza za pomocą mozaik genetycznych

Poznaj automatyczną metodę implantacji ksenograftów nowotworowych u larw Danio rerio przy użyciu systemu robotycznego. Protokół ten umożliwia niezawodne podawanie leków i testowanie skuteczności terapii przeciwnowotworowej in vivo.

Automatyzacja implantacji guzów w larwach danio dano młodego dla badań i medycyny nowotworowej

Przeglądaj więcej filmów