14 listopada 2025
Przedstawiamy tutaj protokół jasno definiujący kroki anastomozy głębokiego węzła chłonnego szyjnego lub jego naczynia aferentnego z tylną żyłą twarzową u szczura, aby zminimalizować wpływ innych zmiennych i ujednolicić prowadzenie badań chirurgicznych.
Nasza technika dcLVA wykazuje obiecujące wyniki w leczeniu choroby Alzheimera, choć mechanizmy pozostają niejasne. Modele zwierzęce są jednak kluczowe do odkrycia. Kluczowym wyzwaniem jest anatomiczna różnica między szczurami a ludźmi.
Standaryzacja punktów i technik chirurgicznych jest kluczowa dla wiarygodnych rezultatów. Na początek zdezynfekuj linię środkową szyi znieczulonego szczura trzy razy, na przemian pomiędzy nalewką jodową a 70% alkoholem izopropylowym, aby zapewnić sterylne pole chirurgiczne. Następnie wykonaj nacięcie środkowe o długości około trzech centymetrów za pomocą skalpela chirurgicznego.
Uważaj, aby nie uszkodzić gruczołu podszczękowego i naczyń krwionośnych podczas rozwarstwienia. Wycofaj skórę, odsłaniając mięsień mostkowo-tarczycowy, mięsień mostkowo-poduszkowo-żółto-naczyniowy oraz mięsień omo-knykowy. Zidentyfikować żyłę twarzową przeduszową, będącą dopływem żyły szyjnej zewnętrznej, wzdłuż bocznego brzegu mięśnia mostkowo-poduszko-posatego.
Na rozgałęzieniu między żyłą twarzową przeduuszną a żyłą szyjną zewnętrzną należy zatkać żyłę przeduuszną twarzy za pomocą mikronaczyniowego klipsa. Kontynuuj tępe rozcinanie żyły twarzy przeduchowej, aby uzyskać odpowiednią długość, i zaciskaj ją na dalszym końcu. Upewnij się, że segment żyły twarzy przedusznej pozostaje jak najbardziej luźny, aby umożliwić dalszą trakcję podczas zenastomozy z głębokim węzłem chłonnym szyjnym.
Następnie wykonaj podłużne nacięcie równoległe do osi naczynia za pomocą nożyczek mikronaczyniowych. Upewnij się, że nacięcie żyły twarzy przeduusznej jest podłużne, ponieważ nacięcie poprzeczne może być powiększone i pęknięte przez trakcję. Dokładnie płukać odizolowany segment naczyniowy heparynizowaną solą fizjologiczną, przygotowaną jako 0,1% heparyny sodu w 0,9% chlorku sodu, aż erytrocyty krwi zostaną całkowicie usunięte.
Zbadaj i całkowicie odsłonij głęboki węzeł chłonny szyjny oraz jego naczynie limfatyczne przychodzące pośrodku mięśnia mostkowo-tarczycowego i mięśnia mostkowo-naczyniowo-naczyniowego. Stopniowo rozcinaj głęboki węzeł chłonny szyjny, używając techniki tępy. Ostrożnie nacinaj powięzi pomiędzy głębokim węzłem chłonnym szyjnego a otaczającymi tkankami, unikając uszkodzenia zarówno węzła, jak i jego naczynia limfatycznego aferentnego.
Upewnij się, że żyła twarzowa przeduszna i głęboki węzeł chłonny szyjny są blisko siebie, aby zminimalizować napięcie po anastomozze. Następnie utworzenie otworu na dalszym końcu głębokiego węzła chłonnego szyjki, częściowo wycinając tkankę węzła chłonnego. Upewnij się, że szerokość otworu jest mniejsza lub zbliżona do średnicy żyły twarzy przedusznej, aby przepływ krwi w żyłie nie był znacząco zakłócony.
Za pomocą szwu nylonowego 12-0 anastomozuj bliższy koniec przedusznej żyły na twarzy do bliższego końca głębokiego nacięcia węzła chłonnego szyjnego. Kontynuuj rozszerzanie długości nacięcia żyły twarzowej przeduchowej aż do dalszego końca, tak aby była nieco większa niż długość głębokiego nacięcia w węzłu chłonnym szyjnym. Następnie przeprowadzić igłę kolejno przez zewnętrzną krawędź głębokiego przecięcia węzła chłonnego szyjnego oraz wewnętrzną krawędź nacięcia żyły twarzowej przed uszem, wciągając tym samym przecięcie węzła chłonnego do światła żyły.
Wykonaj ciągłe cięcie od dolnej do górnej krawędzi głębokiego przecięcia węzła chłonnego szyjnego. Przed zakończeniem końcowego szwu ponownie napłukaj światło roztworem sodu heparyny, aby zapobiec powstawaniu zakrzepów w żyłe twarzy przedusznej. Utrzymuj odpowiednie napięcie na szwie podczas ciągłego zamykania, aby zapewnić bezpieczne zamknięcie i zapobiec późniejszemu przeciekowaniu.
Przeciąć naczynie limfatyczne aferentne i zachować otaczającą tkankę, aby służyła jako punkt kotwiczenia szwów. Za pomocą igły do szwów 12-0 wprowadź ją około dwóch milimetrów blisko nacięcia w żyłie twarzy przeduusznej i przesuń ją do wyjścia przez otwarcie nacięcia żyły. Wchodzi się do tkanki w pobliżu kikuta naczynia limfatycznego aferentnego igłą szwową, aby złapać naczynie.
Przeprowadź igłę do nacięcia przeduusznej żyły twarzowej i wyciągnij przez jej bliższą krawędź, a następnie zwiąż szew, aby utrwalić kikut naczynia limfatycznego aferentnego w świetle żyły. Całkowicie włóż kikut naczynia limfatycznego aferentnego do światła żyły twarzy przedusznej, kierując go w kierunku bliższym, aby utrzymać drenaż fizjologiczny. Na koniec zszyj otaczającą tkankę w pobliżu kikuta naczynia limfatycznego aferentnego do wewnętrznej krawędzi nacięcia żyły twarzowej przedusznej, aby zapewnić zewnętrzne ustabilizowanie.
W głębokiej anastomozzie węzłów chłonnych szyjnych średni kąt barwienia tylnej żyły twarzy po anastomozzie był skierowany na stronę niebieskiego odcienia 278,2 stopnia, w porównaniu do sąsiedniej żyły przedniej twarzy o 327,9 stopnia, a różnica była większa niż tylna żyła twarzy przed nastomozą – 24,8 stopnia. W przypadku głębokiego anegomozy naczynia limfatycznego szyjnego średni kąt barwienia tylnej żyły twarzy po zenastomozzie wynosił 282,4 stopnia, co wykazuje silniejszy niebieski odcień niż sąsiednia żyła przednia twarzy przy 303,7 stopnia, a różnica była bardziej wyraźna niż tylna żyła twarzy przednastomozy, wynosząca 39,6 stopnia. Nasze badanie dostarcza konkretnych odniesień oraz ustandaryzowanych ram dcLVA, w tym dcLNVA i dcLAVA, wspierających zarówno konkretne badania, jak i zastosowania kliniczne.
W przyszłości zbadamy skuteczność i mechanizm tej procedury chirurgicznej w modelach szczurów z AD.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych
Niniejszy artykuł przedstawia zestandaryzowany protokół wykonywania głębokiego szyjnego zespolenia limfatyczno-żylnego (dcLVA) u szczurów, techniki chirurgicznej o potencjalnych zastosowaniach terapeutycznych w chorobie Alzheimera (AD). Protokół szczegółowo opisuje dwie odrębne metody — głębokie szyjne zespolenie węzła chłonnego z żyłą (dcLNVA) oraz głębokie szyjne zespolenie naczynia limfatycznego z żyłą (dcLAVA) — i dostarcza instrukcji krok po kroku, aby ułatwić powtarzalność oraz zminimalizować zmienność eksperymentalną w modelach zwierzęcych.
Znormalizowane protokoły głębokiego zespolenia limfatyczno-żylnego szyi (dcLVA) w modelach szczurzych umożliwiają rygorystyczne badanie mechanizmów drenażu limfatycznego istotnych dla chorób neurodegeneracyjnych. Poprzez minimalizację zmienności proceduralnej, modele te zwiększają wiarygodność prognostyczną w walidacji celów na wczesnym etapie oraz w redukcji ryzyka mechanistycznego w badaniach nad chorobą Alzheimera. Fundament metodologiczny ten zwiększa ciągłość translacyjną oraz usprawnia podejmowanie decyzji portfelowych w zakresie neuronaczyniowych strategii terapeutycznych.
Niniejszy protokół sytuuje modelowanie dcLVA na styku wczesnego etapu odkryć, walidacji celów terapeutycznych oraz badań przedklinicznych w ramach projektów nad chorobami neurodegeneracyjnymi.