Name: Od MEF do Matrigel 2: Podział hESC z MEF na Matrigel (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-09T18:48:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Naucz się utrzymywać ludzkie komórki macierzyste zarodkowe w warunkach bez komórek karmicielskich, przenosząc je z MEF na Matrigel. Poznaj techniki podziału i weryfikacji pluripotencji metodą immunofluorescencji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badania nad ludzkimi embrionalnymi komórkami macierzystymi w laboratorium Teitella są wspierane przez grant zalążkowy California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) RS1-00313. Dziękujemy członkom Broad Center of Regenerative Medicine and Stem Cell Research na UCLA, w szczególności dr Amander Clark, dr Jerome Zack oraz członkom UCLA Broad Institute Stem Cell Core Facility za wsparcie naszych badań.

codzienna pielęgnacja hodowli hESC
<ol>
<li>Pożywkę do hodowli hESC należy wymieniać co 24 h. Z butelki z zapasem pożywki ES przechowywanej w temperaturze 4°C należy odlać potrzebną ilość roztworu (~20ml na płytkę 6-dołkową), przelać go do probówki Falcon 50ml i ogrzać do 37°C w kąpieli wodnej. Po ogrzaniu pożywki należy dodać bFGF przechowywany w temperaturze 4°C do końcowego stężenia 10ng/ml. Zapas bFGF należy natychmiast po użyciu odstawić do temperatury 4°C!</li>
<li>Z płytek 6-dołkowych należy usunąć całą pożywkę, pozostawiając jedynie ~500µl. Należy delikatnie zamieszać naczynie z hodowlą, aby zawiesić zanieczyszczenia i umożliwić ich usunięcie. Po upewnieniu się, że bFGF w pożywce do hodowli hESC został dokładnie wymieszany, należy dodać 3ml świeżej pożywki do każdego dołka płytki 6-dołkowej. Następnie płytkę należy umieścić z powrotem w inkubatorze.</li>
</ol>
Pasażowanie hESC z MEF na Matrigel
Zazwyczaj konfluencyjną płytkę 6-dołkową z hESC na MEF można przesiewać w stosunku od 1:2 do 1:3 na płytki 6-dołkowe z Matrigel, przy czym dołki ponownie stają się konfluencyjne po 4-5 dniach od przesiewania.
<ol>
<li>Podczas przesiewania hESC na Matrigel, w celu utrzymania pluripotencji stosuje się pożywkę warunkowaną fibroblastami zarodkowymi myszy (MEF-conditioned media, CM). Pożywkę warunkowaną MEF przygotowuje się z wyprzedzeniem. Pierwszego dnia 1,5×107 naświetlanych promieniami γ MEF wysiewa się do kolby T75. Drugiego dnia MEF płucze się raz 1×PBS (pH 7,4) o temperaturze pokojowej, a następnie do kolby dodaje się 15 ml pożywki ES uzupełnionej o 5 ng/ml bFGF. (UWAGA: MEF można wysiewać do mniejszych lub większych kolb, jednak proporcja między gęstością komórek a objętością pożywki ES powinna pozostać stała). Kolbę inkubuje się w temperaturze 37°C przez kolejne 24 h. Trzeciego dnia zbiera się CM i zastępuje 15 ml świeżej pożywki ES uzupełnionej o 5 ng/ml bFGF. Zebraną CM przechowuje się w temperaturze 4°C. Pożywkę warunkowaną MEF z jednego wysiewu MEF pobiera się przez siedem kolejnych dni, aby uzyskać 15 × 7 = 105 ml. Po siedmiu dniach wszystkie frakcje CM łączy się, filtruje sterylnie, rozdziela na alykwoty i przechowuje w temperaturze -20°C. Pożywkę CM przygotowaną w opisany sposób można przechowywać i stosować przez 1 miesiąc.</li>
<li>Na dzień przed przesiewaniem hESC alykwoty Matrigelu w probówkach Eppendorf umieszcza się w temperaturze 4°C w celu rozmrożenia przez noc (jedna alykota zawiera 76,2 mg Matrigelu, co jest ilością potrzebną dla jednej płytki 6-dołkowej). W dniu przesiewania jedną fiolkę rozmrożonego Matrigelu dla jednej płytki 6-dołkowej oraz 6 ml zimnej pożywki DMEM/F12 umieszcza się na lodzie. Matrigel przenosi się do pożywki DMEM/F12 i dokładnie miesza. Do każdego dołka płytki 6-dołkowej dodaje się 1 ml roztworu. Płytkę delikatnie potrząsa się, aby rozprowadzić Matrigel po powierzchni, a następnie inkubuje płytkę pokrytą Matrigelem w temperaturze pokojowej przez co najmniej 1 h przed przesiewaniem hESC.</li>
<li>hESC na MEF płucze się raz 1×PBS (pH 7,4). Następnie do każdego dołka płytki 6-dołkowej dodaje się 1 ml ciepłej kolagenazy IV (1 mg/ml), a płytkę inkubuje w temperaturze 37°C przez 5-10 min.</li>
<li>Do każdego dołka dodaje się 1 ml pożywki ES bez bFGF. Za pomocą pipety o objętości 1 ml zmywa się komórki macierzyste z płytki. Całą pożywkę zawierającą agregaty hESC i martwe MEF przenosi się do probówki Falcon 50 ml. Pozostawia się duże agregaty komórek na 5-10 min, aby agregaty hESC utworzyły pellet na dnie probówki, podczas gdy MEF pozostaną w zawiesinie w nadosadzie. Nadosad usuwa się, a pellet hESC płucze poprzez resuspensję w pożywce ES pozbawionej bFGF, a następnie wiruje w temperaturze pokojowej przy 200g przez 5 min.</li>
<li>Aby wysiać komórki macierzyste na płytki z Matrigelem, najpierw płucze się płytki z Matrigelem pożywką DMEM/F12 o temperaturze pokojowej (1 ml na dołek), a następnie dodaje 2,5 ml CM uzupełnionej o 10 ng/ml bFGF na dołek. Pellet resuspenduje się w odpowiedniej objętości CM uzupełnionej o 10 ng/ml bFGF, pipetując zawiesinę komórkową kilkakrotnie w górę i w dół, aż agregaty staną się jednolite i małe. Zawiesinę rozdziela na alykwoty po 0,5 ml na dołek na płytce z Matrigelem. Należy zauważyć, że gęstość kolonii na Matrigelu jest wyższa niż gęstość kolonii przy zwykłym przesiewaniu na MEF. Płytkę umieszcza się w inkubatorze do hodowli tkanek w temperaturze 37°C.</li>
<li>W celu utrzymania hESC na Matrigelu pożywkę CM uzupełnioną o 10 ng/ml bFGF wymienia się co 24 h przez okres do 4-5 dni.</li>
</ol>

<ol><li>Thomson, J. amesA., Itskovitz-Eldor, J. oseph, Shapiro, S. anderS., Waknitz, M. ichelleA., Swiergiel, J. enniferJ., Marshall, V. ivienneS., Jones, J. effreyM. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+Stem+Cell+Lines+Derived+from+Human+Blastocysts++%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts .</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Xu, C. hunhui, Inokuma, M. argaretS., Denham, J. errod, Golds, K. athaleen, Kundu, P. ratima, Gold, J. osephD., Carpenter, M. elissaK. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 19, 971-974 (2001).</li>
</ol>

W tym filmie pokazano, jak przenosić hESC z płytek z MEF na płytki z Matrigelem bez komórek karmiących. Należy zauważyć, że gęstość kolonii na Matrigelu jest wyższa niż gęstość kolonii uzyskiwana podczas zwykłego pasażowania na MEF. Aby potwierdzić utrzymanie hESC w stanie niedróżnicowanym w warunkach hodowli bez komórek karmiących, konieczne jest przeprowadzenie barwienia immunofluorescencyjnego i mikroskopii lub cytometrii przepływowej w celu wykrycia markerów pluripotencji hESC, takich jak Oct-4 i SSEA-4.

<table><tbody><tr><td>zamiennik surowicy Knockout (KSR)</td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11330-057</td><td></td></tr><tr><td> Niezbędne aminokwasy nieessencjalne</td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax </td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>płytkowa krowia surowica (FBS)</td><td>Odczynnik</td><td>Clontech Laboratories</td><td>631107</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>BME</td><td>Odczynnik</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP176-100</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Odczynnik</td><td>R&amp;R&D Systems</td><td>233-FB-025</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenaza IV</td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17104-019</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Odczynnik</td><td>Technologie komórek macierzystych</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina / Streptomycyna </td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Żelatyna</td><td>Odczynnik</td><td>Chemicon International</td><td>ES-006-B</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Odczynnik</td><td>BD Biosciences</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>przeciwciało anty-Oct-4</td><td>Odczynnik</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>SC-9081</td><td></td></tr><tr><td>anty-h/mSSEA-4 Phyc&amp;#8211;rytryna sprzężona z mysim IgG3</td><td>Odczynnik</td><td>R&amp;D Systems</td><td>FAB1435P</td><td></td></tr><tr><td>przeciwciało przeciwko królikiemu IgG sprzężone z FITC</td><td>Odczynnik</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-095-152</td><td></td></tr></tbody></table>

od mef do matrigelu 2: przesiewanie hesc z mef na matrigel

From MEFs to Matrigel 2: Splitting hESCs from MEFs onto Matrigel

W niniejszym filmie zaprezentowano sposób hodowli ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC) na warstwie komórek karmiających z embrionalnych fibroblastów mysich (MEF) oraz sposób pasażowania hESC z płytek z MEF na płytki z Matrigelem bez zastosowania komórek karmiających.

Niniejszy materiał wideo demonstruje sposób utrzymania wzrostu ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESCs) w warunkach bez komórek karmących oraz metodę ciągłego pasażowania hESCs w warunkach bez komórek karmących. Przedstawiono również potwierdzenie pluripotencji hESCs hodowanych bez komórek karmących za pomocą mikroskopii immunofluorescencyjnej. Część 2 z 3.

Od MEF do Matrigelu 2: Przesiewanie hESC z MEF na Matrigel

W niniejszym filmie zademonstrowano sposób hodowli ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC) na warstwie zasilającej z embrionalnych fibroblastów mysich (MEF) oraz sposób pasażowania hESC z MEF...

Aby utrzymać kulturę ludzkich embrionalnych komórek macierzystych, pożywkę hodowlaną należy wymieniać co 24 godziny. W tym celu należy przygotować butelkę z zapasem pożywki dla embrionalnych komórek macierzystych przechowywaną w temperaturze 4 °C. Należy odpiąć potrzebną ilość roztworu, która zazwyczaj wynosi około 20 ml na sześć.Płytkę wielodołkową i przenieś tę ilość do probówki Falcon o pojemności 50 ml, a następnie ogrzej probówkę z zawartością do 37 °C w kąpieli wodnej. Po ogrzaniu medium dodaj FGF, przechowywany w temperaturze 4 °C, do stężenia końcowego 10 ng/ml. Pamiętaj, aby natychmiast po użyciu odłożyć roztwór BFGF z powrotem do temperatury 4 °C.Upewnij się, że BFGF w pożywce do hodowli ludzkich komórek macierzystych amox jest dokładnie wymieszany. Następnie usuń z każdej studzienki całą pożywkę, pozostawiając około 500 µL na studzienkę. W dalszej kolejności dodaj trzy mililitry świeżej pożywki do każdej studzienki płytki 6-dołkowej i umieść płytkę z powrotem w inkubatorze.Po zaprezentowaniu sposobu hodowli ludzkich embrionalnych komórek macierzystych w systemie ONMs, pokażemy teraz, jak przenieść je na matrigel. Aby przesiać ludzkie embrionalne komórki macierzyste hodowane w systemie ONMs na matrigel, zaczynamy od w pełni zrosniętej warstwy komórek macierzystych w płytce 6-dołkowej z systemem mes, które można przesiać w stosunku 1:2 lub 1:3 na płytki 6-dołkowe z matrigelem.Pozwoli to studniom ponownie osiągnąć konfluencję od czterech do pięciu dni po pasażowaniu. Podczas wysiewania ludzkich embrionalnych komórek macierzystych na matrigel, należy użyć pożywki warunkowanej przez komórki mESC w celu utrzymania pluripotencji; pożywka warunkowana mESC jest przygotowywana wcześniej. Odbywa się to poprzez codzienne przez siedem dni zbieranie pożywki, suplementowanej 5 ng/ml BFGF, z rosnącej kultury mESC; usuniętą pożywkę warunkowaną mESC zastępuje się świeżą pożywką dla embrionalnych komórek macierzystych.Codziennie. Pożywka warunkowana MeTH powinna być używana do jednego miesiąca od momentu zebrania i przechowywania w zamrożeniu. Dzień przed pasażowaniem ludzkich embrionalnych komórek macierzystych przenosimy alikwoty matrigelu w probówkach EOR z temperatury -20 °C do 4 °C w celu rozmrożenia przez noc.Jedna alikwota zawiera dwa miligramy Matrigelu, co jest ilością potrzebną dla jednej płytki 6-dołkowej. W dniu pasażowania należy pobrać jedną fiolkę rozmrożonego Matrigelu.Do każdej płytki sześcio-dołkowej i wymieszaj każdą fiolkę z sześcioma mililitrami schłodzonej pożywki D-M-E-M-F 12. Pamiętaj, aby trzymać te próbki w lodzie. Dodaj jeden mililitr roztworu do każdego dołka płytki sześcio-dołkowej.Następnie delikatnie zakręć płytką, aby rozprowadzić matrigel po powierzchni, i inkubuj płytkę pokrytą matrigelem w temperaturze pokojowej przez co najmniej jedną godzinę przed rozdzieleniem ludzkich embrionalnych komórek macierzystych. Przed rozdzieleniem ludzkich embrionalnych komórek macierzystych przemyj komórki macierzyste na MES raz za pomocą jednego XPBS pH 7.4. Następnie do każdej studni, z której rozdzielasz komórki, dodaj jeden mililitr ciepłej kolagenazy IV w stężeniu 1 mg/ml, a następnie inkubuj płytkę w temperaturze 37 °C przez 5 do 10 minut.Po inkubacji do każdej studni należy dodać 1 ml pożywki dla embrionalnych komórek macierzystych bez BFGF. Za pomocą pipety 1 ml należy zdmuchnąć komórki macierzyste z płytki. Całą pożywkę zawierającą skupiska komórek macierzystych i martwe MES należy zebrać do probówki Falcon 15 ml. Pozostawić duże skupiska komórek na pięć minut, aby skupiska komórek macierzystych utworzyły osad na dnie probówki, podczas gdy MES pozostaną zawieszone w nadosadzie.Po tym, jak komórki wydadzą się osiąść, należy usunąć nadsącz i wypłukać komórki, ponownie zawieszając pellet embrionalnych komórek macierzystych. Używając pożywki dla embrionalnych komórek macierzystych bez BFGF, odwiruj próbkę w temperaturze pokojowej przy 200 ×g przez pięć minut. Podczas wirowania komórek można przygotować płytki z matrigelem do wysiewu komórek macierzystych, płucząc płytki D-M-E-M-F 12 w temperaturze pokojowej w ilości 1 ml na dołek, a następnie dodając 2,5 ml kondycjonowanej pożywki uzupełnionej o 10 ng/ml.BFGF na każdą studzienkę po wirowaniu. Resuspenduj, zawieszając osad w odpowiedniej objętości pożywki warunkowanej przez meth uzupełnionej o 10 ng/mL BFGF; pipetuj zawiesinę komórkową w górę i w dół kilka razy, aż grudki staną się jednolite i małe.Następnie nanieś zawiesinę w ilości 0,5 ml na dołek na płytce z Matrigelem, aby uzyskać końcową objętość 3 ml na dołek. W przypadku Matrigelu stosujemy wyższą gęstość kolonii niż przy zwykłym pasażowaniu na płytkach po dodaniu komórek. Umieść płytkę w inkubatorze do hodowli tkankowych w temperaturze 37 °C.W celu utrzymania ludzkich embrionalnych komórek macierzystych w warunkach hodowli na Matrigelu, pożywkę uzupełnioną o 10 ng/ml bFGF wymienia się co 24 godziny przez okres od czterech do pięciu dni.Ludzkie embrionalne komórki macierzyste są zazwyczaj zanieczyszczone pozostałościami MEF po pierwszym pasażowaniu na matrigelu; drugi pasaż z matrigelu na Matrigel całkowicie usunie wszelkie ślady komórek dokarmiających zanieczyszczających kulturę komórek macierzystych.

from-mefs-to-matrigel-2-splitting-hescs-from-mefs-onto-matrigel

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Od MEFs do Matrigel 2: Przenoszenie hESC z MEF na Matrigel

W tym filmie pokazujemy, jak w naszym laboratorium rutynowo fragmenty barwy linii ludzkich zarodkowych komórek macierzystych, z trypsyny.

Barwy Pasażowanie ludzkich embrionalnych komórek macierzystych linii Trypsyna

Ten film demonstruje sposób hodowli ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESCs) na warstwie komórek karmicielskich z embrionalnych fibroblastów mysich (MEF). Część 1 z 3.

Od MEF do Matrigelu I: Pasażowanie hESC w obecności MEF

W niniejszym filmie zaprezentowano sposób utrzymania wzrostu ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESCs) w warunkach bez komórek karmionek oraz sposób ciągłego pasażowania hESCs w warunkach bez komórek karmionek. Przedstawiono również potwierdzenie pluripotencji hESCs hodowanych bez komórek karmionek za pomocą mikroskopii immunofluorescencyjnej. Część 3 z 3.

Od MEF do Matrigelu 3: Pasażowanie hESC z Matrigelu na Matrigel

Ten artykuł skupi się na generowaniu ludzkiej endodermy wątrobowej z populacji ludzkich embrionalnych komórek macierzystych.

Solidna generacja komórek podobnych do hepatocytów z ludzkich embrionalnych populacji komórek macierzystych

Jakość embrionalnych fibroblastów mysich (MEFs) zależy od wyboru odpowiedniego szczepu myszy, takiego jak CF-1. MEFs wspierające pluripotencję oraz pożywka warunkowana (CM) uzyskana z tych komórek powinny zawierać optymalne stężenia Activin A, Gremlin oraz Tgfβ1, które są niezbędne do współdziałania szlaków Activin/Nodal i FGF w celu utrzymania samoodnawiania i pluripotencji.

Przygotowanie komórek fibroblastów zarodkowych myszy odpowiednich do hodowli ludzkich embrionalnych i indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych

Pomimo podejmowanych wysiłków w celu przejścia na warunki hodowli bez komórek podporowych, izolacja i hodowla ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC) pozostają w dużej mierze zależne od kokultur z embrionalnymi fibroblastami mysimi (MEFs). W niniejszej pracy przedstawiamy nową metodologię szybkiego usuwania komórek podporowych z kultur hESC przed przystąpieniem do eksperymentów.

Szybkie usuwanie fibroblastów z gęstych kultur ludzkich embrionalnych komórek macierzystych

Tutaj opisujemy protokół oparty na epigenetycznym przeprogramowaniu ludzkich embrionalnych komórek macierzystych (hESC) w kierunku generowania jednorodnej populacji komórek progenitorowych mięśni szkieletowych, które w dopuszczalnych warunkach hodowli tworzą trójwymiarowe skupiska kurczliwych włókien mięśniowych (miosfer), które podsumowują biologiczne cechy ludzkich mięśni szkieletowych.

Generowanie miosfer z hESC poprzez przeprogramowanie epigenetyczne

Tutaj prezentujemy protokoły hodowli ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych (hPSC), oparte na wzroście pojedynczych komórek bez typu kolonijnego (NCM) zdysocjowanych pojedynczych komórek. Ta nowa metoda, wykorzystująca inhibitory kinaz związane z Rho lub izoformę lamininy 521 (LN-521), jest odpowiednia do wytwarzania dużych ilości jednorodnych hPSC, manipulacji genetycznych i odkrywania leków.

Alternatywne hodowle do produkcji, utrzymania i analizy genetycznej ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych

Reporterowe linie komórkowe oferują sposób na wizualizację, śledzenie i izolowanie interesujących komórek z heterogenicznych populacji. Jednak celowanie w geny za pomocą konwencjonalnej rekombinacji homologicznej w ludzkich embrionalnych komórkach macierzystych jest wyjątkowo nieefektywne. W tym miejscu opisujemy celowanie w locus czynnika transkrypcyjnego PITX3 specyficznego dla OUN za pomocą EGFP przy użyciu rekombinacji homologicznej wzmocnionej nukleazą palca cynkowego.

Ukierunkowanie genów na nukleazę palca cynkowego w ludzkich embrionalnych komórkach macierzystych

Tutaj prezentujemy protokół efektywnego generowania ludzkich komórek trofoblastycznych z ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych przy użyciu białka morfogennego kości 4 i inhibitorów szlaków aktywinowych/węzłowych. Metoda ta jest odpowiednia do skutecznego różnicowania ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych i może generować duże ilości komórek do manipulacji genetycznej.

In vitro Różnicowanie ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych w komórki trofoblastyczne

Białka często zawierają wiele domen, które mogą pełnić różne funkcje komórkowe. Nokauty genów (KO) nie uwzględniają tej różnorodności funkcjonalnej. W tym miejscu przedstawiamy podejście oparte na wymianie kasetowej za pośrednictwem rekombinacji (RMCE) oparte na strukturze i funkcji w embrionalnych komórkach macierzystych KO, które pozwala na molekularną sekcję różnych domen funkcjonalnych lub wariantów białka.

Badania strukturyczno-funkcjonalne w embrionalnych komórkach macierzystych myszy z wykorzystaniem wymiany kasetowej za pośrednictwem rekombinazy

Naucz się utrzymywać ludzkie komórki macierzyste zarodkowe w warunkach bez komórek karmicielskich, przenosząc je z MEF na Matrigel. Poznaj techniki podziału i weryfikacji pluripotencji metodą immunofluorescencji.

Od MEF do Matrigelu 2: Przesiewanie hESC z MEF na Matrigel

Przeglądaj więcej filmów