Fotossíntese
- Cromatografia de pigmento vegetal
- NOTA: Neste experimento, você separará os pigmentos das folhas de espinafre usando papel de cromatografia. Pigmentos individuais viajam ao longo do papel em taxas diferentes e podem ter cores diferentes. Ao calcular a distância relativa que os pigmentos percorrem, seu fator de resolução e compará-los com os valores da literatura, você pode identificar diferentes pigmentos. HIPÓTESES: Neste exercício, a hipótese experimental é que haverá vários pigmentos dentro das folhas de espinafre que absorvem diferentes comprimentos de onda da luz solar. A hipótese nula é que existe apenas um tipo de pigmento dentro da folha de espinafre.
- Use um lápis para fazer uma linha a dois centímetros de uma extremidade do papel de cromatografia.
- Em seguida, coloque um limpador de cachimbo horizontalmente na parte superior de um copo limpo de 400 mL.
- Coloque o lado marcado a lápis da tira de cromatografia na parte inferior do copo.
- Em seguida, enrole o papel ao redor do limpador de cachimbo de forma que a borda inferior mal toque a parte inferior do béquer e, em seguida, prenda-o com um clipe de papel.
- Quando o papel estiver preso ao redor do limpador de cachimbo, remova-o do béquer e, em seguida, coloque uma folha de espinafre seca sobre a linha marcada no papel de cromatografia.
- Role uma moeda sobre a folha de espinafre ao longo da linha do lápis, indo e voltando várias vezes e aplicando pressão constante. Quando a folha é removida, uma linha verde deve estar claramente presente.
- Em seguida, coloque 8 mL de solvente de cromatografia no béquer.
- Abaixe a tira de cromatografia no béquer de modo que a borda do papel toque no solvente, mas a linha verde não. Ajuste o limpador de cachimbo, se necessário.
- Sem perturbar o copo, observe o solvente à medida que ele sobe pelo papel e os pigmentos individuais se separam.
- Quando o solvente tiver percorrido metade do papel de cromatografia, o que levará aproximadamente 10 minutos, e os pigmentos estiverem separados em faixas bem definidas, remova o papel do béquer.
- Marque a distância percorrida pelo solvente com um lápis e deixe o papel secar. NOTA: O solvente evapora rapidamente.
- Em seguida, registre o número de bandas visíveis e descreva sua cor e tamanho relativo.
- Meça a distância percorrida pelo solvente e pelos pigmentos e registre essas informações para cada pigmento na Tabela 1. Clique aqui para baixar a Tabela 1
- Descarte o solvente de cromatografia em um recipiente de resíduos sob uma capela de exaustão. Jogue as tiras de cromatografia no lixo comum e limpe os copos com água e sabão.
- Discos de folha flutuantes no vácuo
- NOTA: Neste experimento, você observará indiretamente a fotossíntese e a respiração celular usando um disco de folha flutuante em uma solução. Durante a fotossíntese, as bolhas de ar farão com que as folhas flutuem e, durante a respiração, os discos afundarão. HIPÓTESES: Neste exercício, a hipótese experimental é que os discos foliares terão uma maior taxa de fotossíntese na solução de bicarbonato, pois o bicarbonato fornece CO2 adicionado para alimentar a fotossíntese, fazendo com que mais discos foliares flutuem. Além disso, todos os discos afundam em condições escuras enquanto realizam a respiração celular. A hipótese nula é que não haverá diferença na taxa de fotossíntese e, portanto, no número de discos flutuantes, entre o bicarbonato e a água, ou os tratamentos claro e escuro.
- Para colocar discos de folhas sob vácuo, primeiro remova os êmbolos de duas seringas de 20 mL e, em seguida, coloque 10 discos de folhas dentro de cada tubo de seringa. Rotule uma seringa como "bicarbonato" e rotule a outra seringa como "água".
- Substitua os êmbolos e empurre o êmbolo até que reste apenas uma pequena quantidade de ar na seringa. Tome cuidado para não danificar os discos das folhas.
- Puxe 5 mL da solução de bicarbonato para uma das seringas. Inverta e gire a seringa para suspender os discos das folhas na solução.
- Empurre o máximo de ar possível para fora sem expelir a solução ou danificar os discos das folhas.
- Em seguida, puxe 5 mL da solução aquosa para a outra seringa e agite-a conforme descrito anteriormente (etapa 3).
- Para criar um vácuo, mantenha um dedo sobre a ponta da seringa enquanto puxa o êmbolo para trás. Segure por 10 segundos enquanto gira a seringa para manter os discos das folhas em suspensão.
- Em seguida, solte o aspirador. NOTA: Os discos devem ter absorvido a solução nos espaços aéreos em seus tecidos e você deve vê-los afundar. Se os discos não afundarem, você pode repetir a criação de vácuo até três vezes.
- Em seguida, adicione 50 mL de solução de bicarbonato a um copo de plástico ou copo de vidro e, em seguida, adicione suavemente os discos da seringa a vácuo de bicarbonato.
- Para o controle, adicione a mesma quantidade de água a um copo idêntico e, em seguida, adicione os discos de folhas da seringa de vácuo de água. Rotule os recipientes adequadamente.
- Coloque os dois copos sob uma fonte de luz.
- A cada cinco minutos, registre o número de discos flutuando na superfície do copo na Tabela 3 até que 20 minutos tenham passado. Clique aqui para baixar a Tabela 3
- Em seguida, remova os copos da fonte de luz e gire-os para que os discos na superfície se misturem com quaisquer gases também na superfície.
- Mova os copos para um local escuro. A cada cinco minutos, registre o número de discos de folhas flutuando na superfície até que 20 minutos tenham se passado. Gire o copo a cada vez antes de colocá-lo de volta no escuro.
- Para limpar, descarte os discos de folhas no lixo e despeje a solução de bicarbonato no ralo. Lave bem as seringas e os copos.
- Resultados
- NOTA: No primeiro experimento, você observou a distância que os pigmentos das folhas de espinafre percorreram em papel de cromatografia. Diferentes pigmentos absorvem luz em diferentes comprimentos de onda.
- Usando canetas ou lápis de cor, desenhe as posições das faixas de pigmento e do solvente na Figura 3.
- Calcule o fator de retenção, ou valores de Rf para os pigmentos, o que é feito dividindo a distância que o pigmento em questão moveu para cima do papel a partir da linha pela distância que o solvente moveu para cima o papel a partir da linha.
- Compare seus valores de Rf calculados com os da Tabela 2 para determinar a identidade do pigmento. Clique aqui para baixar a Tabela 2
- Registre esses dados na Tabela 1. NOTA: No segundo experimento, você observou discos de folhas flutuantes e afundando como uma medida indireta da fotossíntese e da respiração.
- Represente graficamente os resultados com tempo e minutos no eixo x e número de discos flutuantes no eixo y. Use duas linhas diferentes para representar o controle da água e o tratamento com bicarbonato.
- Adicione uma linha ao gráfico para indicar o ponto onde os discos foram removidos da condição de luz e colocados no escuro.
- Em seguida, começando com a condição de bicarbonato, use o gráfico para determinar o ponto em que 50% dos discos foliares estavam flutuando. Isso é chamado de tempo efetivo, ou ET50. NOTA: Você notará que os discos provavelmente atingiram a marca de 50% de flutuação uma vez na condição de luz e depois novamente na condição de escuridão.
- Suas amostras de água podem ou não ter atingido a marca ET50. Se o fizeram, adicione a linha para este exemplo também.
- Por fim, compare seus valores e gráficos ET50 com o resto da classe.