Artigo de método

Medição Caenorhabditis elegans Expectativa de Vida em meios sólidos

DOI:

10.3791/1152

⸱

12 de maio de 2009

 , 
1Department of Pathology, University of Washington, 2Molecular and Cellular Biology Program, University of Washington

Neste artigo

Resumo

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Neste artigo apresentamos um protocolo geral para medir a expectativa de vida dos nematóides mantidos em meios sólidos com alimentos UV-morto bacteriana.

Resumo

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O envelhecimento é um processo degenerativo caracterizado por uma deterioração progressiva de componentes celulares e organelas, resultando em mortalidade. O nematóide

Protocolo

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Parte 1: Prepare nematóide crescimento media (NGM) placas

Esta seção descreve a preparação das placas NGM sólido para uso no experimento vida. A experiência de extensão básicas da vida requer dois tipos de placas: placas NGM padrão, que não contêm aditivos, e Amp / FUDR placas, que têm ampicilina (Amp) e fluorodeoxyuridine (FUDR) adicionado ao NGM. Ampicilina é usado para prevenir a contaminação bacteriana estrangeiros. FUDR inibe a divisão celular, reduz a produção de ovos, e impede que os ovos de incubação. O uso de FUDR para a análise da longevidade não afeta expectativa de vida de adultos e elimina a necessidade de transferência de worm....

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Discussão

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O controle genético da longevidade tem sido estudado extensivamente em C. elegans, em grande parte devido à facilidade e rapidez com que expectativa de vida pode ser determinada. O protocolo discutido neste artigo descreve uma estrutura básica para a obtenção de dados de vida reprodutíveis extensão em C. elegans e também pode ser aplicado às espécies relatednematode. 2 Ao fazer algumas alterações simples desses procedimentos pode ser adaptado para medir a expectativa de vida sob uma variedad.......

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Agradecimentos

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Este trabalho foi financiado por um Avanços Glenn / AFAR em Gerontologia e Grant Award NIH 1R01AG031108-01 a MKGS é suportado pelo NIH treinamento conceder P30AG013280. MK é um Ellison Medical Foundation Scholar novo no Envelhecimento.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
ÁgarReagenteFisher ScientificDF0145-17-0 (214530)
AmpicilinaReagenteCiência Média0339
BactoTriptonaReagenteFisher ScientificDF0123-17-3 (211705)
BactoPeptoneReagenteFisher ScientificDF0118-17-0 (211677)
CaCl2ReagenteFisher ScientificNC9699248 (1332-01)
CarbenicilinaReagenteBiotecnologia do OuroC0109
ColesterolReagenteSigma-AldrichC75209
Fluorodesoxiuridina (FUDR)ReagenteSigma-AldrichF0503
Isopropil β-d-Tiogalactopiranósido (IPTG)ReagenteBiotecnologia do OuroI2481C5
KPi DibasicReagenteFisher Scientific5087862 (3252-01)
KPi MonobasicReagenteFisher Scientific5087861 (3246-01)
MgSO4ReagenteFisher ScientificNC9561800 (2500-01)
NaClReagenteFisher ScientificS251
TrisReagenteSigma-AldrichT1503
Extrato de LeveduraReagenteFisher ScientificDF0886-17-0 (288620)

Referências

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  1. Wood, W. B. The Nematode Caenorhabditis elegans. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).
  2. Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).....

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