Neste artigo apresentamos um protocolo geral para medir a expectativa de vida dos nematóides mantidos em meios sólidos com alimentos UV-morto bacteriana.
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Artigo de método
Medição Caenorhabditis elegans Expectativa de Vida em meios sólidos
Neste artigo
Resumo
Resumo
O envelhecimento é um processo degenerativo caracterizado por uma deterioração progressiva de componentes celulares e organelas, resultando em mortalidade. O nematóide
Protocolo
Parte 1: Prepare nematóide crescimento media (NGM) placas
Esta seção descreve a preparação das placas NGM sólido para uso no experimento vida. A experiência de extensão básicas da vida requer dois tipos de placas: placas NGM padrão, que não contêm aditivos, e Amp / FUDR placas, que têm ampicilina (Amp) e fluorodeoxyuridine (FUDR) adicionado ao NGM. Ampicilina é usado para prevenir a contaminação bacteriana estrangeiros. FUDR inibe a divisão celular, reduz a produção de ovos, e impede que os ovos de incubação. O uso de FUDR para a análise da longevidade não afeta expectativa de vida de adultos e elimina a necessidade de transferência de worm....
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Discussão
O controle genético da longevidade tem sido estudado extensivamente em C. elegans, em grande parte devido à facilidade e rapidez com que expectativa de vida pode ser determinada. O protocolo discutido neste artigo descreve uma estrutura básica para a obtenção de dados de vida reprodutíveis extensão em C. elegans e também pode ser aplicado às espécies relatednematode. 2 Ao fazer algumas alterações simples desses procedimentos pode ser adaptado para medir a expectativa de vida sob uma variedad.......
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Agradecimentos
Este trabalho foi financiado por um Avanços Glenn / AFAR em Gerontologia e Grant Award NIH 1R01AG031108-01 a MKGS é suportado pelo NIH treinamento conceder P30AG013280. MK é um Ellison Medical Foundation Scholar novo no Envelhecimento.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Ágar | Reagente | Fisher Scientific | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicilina | Reagente | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagente | Fisher Scientific | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptona | Reagente | Fisher Scientific | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagente | Fisher Scientific | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicilina | Reagente | Gold Biotechnology | C0109 | |
| Colesterol | Reagente | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodesoxiuridina (FUDR) | Reagente | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropil β-d-Tiogalactopiranosídeo (IPTG) | Reagente | Gold Biotechnology | I2481C5 | |
| KPi dibásico | Reagente | Fisher Scientific | 5087862 (3252-01) | |
| KPi monobásico | Reagente | Fisher Scientific | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO₄4 | Reagente | Fisher Scientific | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagente | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagente | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Extrato de levedura | Reagente | Fisher Scientific | DF0886-17-0 (288620) |
Referências
- Wood, W. B. The Nematode Caenorhabditis elegans. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).
- Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).....
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Reimpressões e permissões
