Aqui nós descrevemos um protocolo para analisar a migração de células gliais no olho Drosophila desenvolvimento, utilizando análise microscópica ao vivo emparelhado com GFP tag células gliais.
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Artigo de método
Imagens ao vivo da migração das células da glia no Disco Drosophila Eye Imaginal
Neste artigo
Resumo
Resumo
Células gliais de ambos os vertebrados e organismos invertebrados devem migrar para regiões de destino final para ensheath e apoio neurônios associados. Embora o progresso recente tem sido feito para descrever a migração de células gliais na ala desenvolvimento pupal (1), estudos de
Protocolo
Parte 1: Pré-experimental set-up.
- Uma semana de antecedência, mate moscas para gerar larva que expressam GFP sob o controle de um promotor glial específico. Para nosso experimento foi visualizada GFP marcado com uma seqüência de localização nuclear expresso em células gliais usando a polaridade invertida (repo) promotor (3, 4).
- Prepare tampa desliza pelo menos um dia de antecedência por imersão 18 milímetros lamínulas redondas de 10 minutos em 1% de poli-L-lisina solução e ar seco durante a noite.
- No dia antes do experimento, limpar uma câmara de cultura Chamlide magnética por imersão componentes durante a noite em etanol 70%. ....
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Discussão
Neste protocolo, descrevemos a observação da migração de células gliais no disco imaginal olho através de microscopia ao vivo. No nosso exemplo de tipo selvagem (Figura 1 AD), foi utilizado um marcador GFP nuclear para observar a movimentação das células gliais no disco do olho ao longo de uma hora. Em um mutante de um gene candidato necessários para a migração de células gliais actualmente em estudo no nosso laboratório, observamos um adiamento de núcleos de células gliais no talo óptico durante um período de .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a declarar.
Agradecimentos
Patrick Cafferty é apoiado por uma bolsa de pós-doutorado da Sociedade de Esclerose Múltipla do Canadá.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Poli-L-lisina | Reagente | Sigma-Aldrich | P8920 | |
| Meio para Insetos de Schneider’s | Reagente | Sigma-Aldrich | S0146 | |
| Penicilina-Estreptomicina | Reagente | Sigma-Aldrich | P4458 | |
| Solução de insulina de pâncreas bovino | Reagente | Sigma-Aldrich | I0516 | |
| Câmara magnética Chamlide | Ferramenta | Live cell Instrument | CM-R-10 | Câmara do tipo placa de 35 mm para lamínula de 18 mm |
| Tesoura cirúrgica ultrafina | Ferramenta | Fine Science Tools | 15200-00 | |
| Pinzas Dumont nº 5 | Ferramenta | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Microscópio fluorescente | Microscópio | Carl Zeiss, Inc. | Qualquer sistema de imagem fluorescente que possua os filtros e excitação necessários para GFP pode ser utilizado. |
Referências
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N.
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Reimpressões e permissões
