Envelhecimento cronológico em levedura refere-se à perda de viabilidade celular associada ao tempo na fase estacionária. Aqui nós descrevemos um método de alto rendimento para determinar quantitativamente fermento esperança de vida cronológica.
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Artigo de método
Quantificar Yeast Life Span cronológica por conseqüência de células envelhecidas
Neste artigo
Resumo
Resumo
A levedura de brotamento
Protocolo
Parte 1: Preparação das culturas de envelhecimento
- Cepas raia de interesse dos estoques congelados em placas de ágar YEPD (extrato de levedura 1%, 2% Bacto-peptona, agar 2%, 2% de glicose).
- Incubar as células em 30 ˚ C durante 48 horas ou até colônias única aparecer.
- Escolha colônias única e inocular em 5 mL de meio líquido YEPD (extrato de levedura 1%, 2% Bacto-peptona, 2% de glicose) em tubos de ensaio.
- Crescer culturas durante a noite a 30 ˚ C, mantendo agitação constante utilizando um shaker ou tambor do rolo.
- Inocular 5 mL de meio sintético (SC) completa (Tabela 1) com 50 mL da cultura durante a noite. Geralment....
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Discussão
O alto rendimento cronológica ensaio expectativa de vida aqui descrito é um método eficaz para quantificar o potencial de envelhecimento de um grande número de cepas com alta precisão e de precisão. O principal avanço deste método em relação aos métodos clássicos de determinação de sobrevivência através da contagem de unidades formadoras de colônia (por exemplo, ver 3) é o uso de um dispositivo de leitura shaker / incubadora / placa, como a máquina Bioscreen MBR C para obtenção de curvas de alta resolução de .......
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Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo NIH Grant 1R21AG031965-01A1. MK é um Ellison Medical Foundation Scholar novo no Envelhecimento.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagente | BD Biosciences | 211677 | |
| Extrato de Levedura Bacto | Reagente | BD Biosciences | 288620 | |
| Ágar Difco | Reagente | BD Biosciences | 214530 | |
| Base de Nitrogênio para Levedura sem A.A. e A.S. | Reagente | MidSci | J630-500G | |
| Ácidos Aminoácidos | Reagente | Sigma-Aldrich | ||
| Sulfato de Amônio | Reagente | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagente | Fisher Scientific | D16-10 | |
| Equipamento Bioscreen C MBR | Ferramenta | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Placa Honeycomb de 100 poços Bioscreen | Ferramenta | Growth Curves USA | 9502550 |
Referências
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29(2008).
- Kaeberlein, M. Handbook of models for human aging. Conn, P. M. , Elsevier Press. Boston. 109(2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D.
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Reimpressões e permissões
