Esta técnica expõe a Drosophila neuromusculature embrionárias para imuno-histoquímica ou gravação eletrofisiológico. É útil para o estudo de eventos no início do desenvolvimento neuromuscular ou a realização de eletrofisiologia em mutantes que não podem eclodir.
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Artigo de método
Colheita e Preparação Drosophila Os embriões para Gravação eletrofisiológicos e outros procedimentos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Drosophila é um modelo premier genética para o estudo de ambos o desenvolvimento embrionário e neurociência funcional. Tradicionalmente, esses campos são muito afastadas umas das outras, com histórias em grande parte independentes e comunidades científicas. No entanto, a interface entre esses campos normalmente díspares são os programas de desenvolvimento subjacente aquisição de propriedades funcionais elétricos de sinalização e diferenciação das sinapses químicas funcionais durante as fases finais da formação de circuitos neurais. Esta interface é uma área extremamente importante para a investigação. Em Drosophila, estas fases de desenvolvimento funcional ocorrem durante um período de <8 horas (a 25 ° C) durante o último terço da embriogênese. Este período final de desenvolvimento foi considerado por muito tempo intratáveis devido a investigação para a deposição de um resistente, impermeável cutícula epidérmica. Um avanço de avanço foi a aplicação de cola de água polimerização cirúrgica que pode ser aplicado localmente para a cutícula para que a dissecção controlada de embriões em estágio avançado. Com uma incisão dorsal longitudinal, o embrião pode ser deitadas, expondo o cordão nervoso ventral e musculatura da parede do corpo à investigação experimental. Este sistema tem sido fortemente usada para isolar e caracterizar mutantes genéticos que impedem a formação da sinapse embrionárias e, assim, revelar os mecanismos moleculares que regem a especificação e diferenciação das conexões sinápticas funcionais sinapse e propriedades de sinalização.
Protocolo
Parte 1: Equipamentos e Suprimentos
- Um microscópio de dissecção bom é necessário para dissecção embrião; aumento de 40 vezes é sugerido, com 25X de olhos pedaços ao máximo aumentar a ampliação.
- Forceps multa (número 5) são necessários para a seleção manual de embriões e devitellinization de embriões.
- Equipamentos para fazer e modificar agulhas finas de vidro é necessário. Puxado vidro agulhas são necessários para a dissecção. Nós preferimos vidro sólido para dissecção (duram mais), mas tubos de vidro padrão de paredes espessas (diâmetro externo 1-1,5 mm) funciona tão bem. Algumas pessoas usam agulhas de tungstênio fino, eletrolítica par....
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Discussão
Encenação precisa de embriões é crítica devido à maturação rápida de propriedades funcionais ao longo do tempo de apenas algumas horas. Várias questões complicar este teste. Primeiro, a maioria dos pesquisadores usa ovo cronometrado estabelece a fase de embriões, mas o tempo de postura pode variar enormemente de animal para animal em diferentes condições (Broadie et al. 1992). Em particular, as fêmeas em uma dieta limitada tendem a reter ovos fertilizados por períodos prolongados antes do assentamento. Portanto, é funda.......
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Agradecimentos
KB é suportado pelo NIH conceder GM54544.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Coletores de embriões | Genesee Scientific | 59-100 (para placa de 60 mm; outros tamanhos disponíveis) | Os coletores também podem ser feitos em laboratório usando béqueres tri-pour perfurados, conforme mostrado no vídeo |
| Sylgard 184 | Dow Corning | Disponível em várias empresas | A cola cirúrgica adere melhor a lamínulas revestidas com sylgard |
| Tubos de vidro fino, diâmetro externo de 1,0-1,5 mm | Vários | Para puxar e formar agulhas de vidro finas para dissecação e tubos para aplicação de cola | |
| Tubo plástico, para acoplar ao pipeta de vidro para sucção bucal e aplicação de cola | Tygon | O diâmetro interno do tubo deve corresponder ao diâmetro externo do vidro. |
Referências
- Aravamudan, B., Fergestad, T., Davis, W. S., Rodesch, C. K., Broadie, K. Drosophila UNC-13 is essential for synaptic transmission. Nat. Neurosci. 2, 965-971 (1999).
- Auld, V. J., Fetter, R. D., Broadie, K., Goodman, C. S. Gliotactin a novel transmem....
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Reimpressões e permissões
