Doença de Parkinson é causada pela perda da inervação dopaminérgica para o estriado, que pode ser induzida experimentalmente por 6-OH-dopamina. Descrevemos como executar uma lesão estereotáxica e monitorar induzida por apomorfina comportamento rotacional em camundongos. Este modelo é útil e confiável para testes de novas terapias para a doença de Parkinson.
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Artigo de método
Modelo murino para a doença de Parkinson: a partir de 6-OH lesão dopamina para teste comportamental
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Resumo
Resumo
Doença de Parkinson (PD) afeta pelo menos 6,5 milhões de pessoas em todo o mundo, independentemente do sexo, as fronteiras sociais, étnicas, econômicas ou geográficas. Principais sintomas, como rigidez, tremor e bradikinesia, desenvolver-se quando cerca de 3 / 4 de células dopaminérgicas são perdidos na substância negra, e não conseguem prever o regulamento, suave coordenada dos circuitos motores estriatal. Depressão e alucinações são comuns, e demência, eventualmente, ocorre em 20% dos pacientes. Neste momento, não existe um tratamento para retardar ou parar a progressão da DP. Pelo contrário, o objectivo do medicações atualmente disponíveis mais para o alívio destes sintomas. Novas estratégias cirúrgicas podem reversivelmente ligar os circuitos danificados funcionalmente através da estimulação elétrica de estruturas cerebrais profundas, mas apesar de estimulação profunda do cérebro é um grande avanço, não é adequado para todos os pacientes. Permanece, portanto, necessário para testar abordagens nova terapia celular em modelos pré-clínicos.
Perturbações neurotóxicas seletiva de vias dopaminérgicas podem ser reproduzidas pela injeção de 6 hidroxidopamina (6-OHDA) ou MPTP (1-metil-4-fenil-1 ,2,3,6-tertahydropyridine), enquanto esgotando drogas e produtos químicos prejudiciais à oxidativo pode também reproduzir características específicas de PD em roedores. Ao contrário de MPTP, 6-OHDA lesões causar perda irreversível maciça neuronal, e podem ser uni ou bilateral. O modelo de lesão 6-OHDA é de confiança, leva ao déficit motor robusto, e é o mais amplamente utilizado após 40 anos de pesquisa em rats1. Como as interações entre as células enxertadas e host pode agora ser estudado mais profundamente em ratos e não em ratos, o modelo foi transposto para 2,3 camundongos, onde foi recentemente caracterizada 4.
Neste vídeo, demonstramos como a lesão da via Nigro-estriatal esquerda de ratos anestesiados por lentamente entregando 2,0 mL de 6-OHDA através de uma agulha inserida stereotaxically micro-seringa. A perda da entrada dopaminérgica ocorre dentro de dias, e as deficiências funcionais podem ser monitorados ao longo do pós-operatório semanas e meses por rotações de classificação de animais induzida por agentes dopaminérgicos 5. Aqui, vamos mostrar de corpo inteiro rotações contralateral ocorre 10 minutos após uma única administração subcutânea da apomorfina, medido um mês após a lesão. Resultados e as desvantagens são discutidas abaixo.
Protocolo
Todos os produtos químicos armazenados na forma sólida, como 6-OHDA e apomorfina, foram diluídos em água de injeção estéril e filtrado dentro de uma capela de fluxo laminar, para evitar a contaminação. Além disso, neurotoxinas e substâncias neuroactive foram armazenados, preparados, manipulados e eliminados de acordo com normas estabelecidas pelas diretrizes internacionais 6 e os locais de Biossegurança.
1 - A anestesia e cirurgia
Adulto masculino camundongos suíços (25-30g) são pré-medicados com Atropina (0,2 mg / Kg, sc) para reduzir o tônus vagal e anestesiados com injeção intraperitoneal de keta....
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Discussão
Extensa lesão unilateral da via Nigro-estriatal pode ser alcançado de forma confiável em camundongos por uma única injeção estereotáxica de 6-OHDA no striatum. A extensão da lesão pode ser verificado post-mortem por imuno-histoquímica para a tirosina hidroxilase (que catalisa a etapa limitante da taxa da síntese de DA, ou seja, a conversão de L-Tirosina para dihidroxifenilalanina), como ilustrado no vídeo.
In vivo, as rotações contralaterais induzidas por apomorfina é um melhor preditor de l.......
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Divulgações
Experimentos foram realizados em conformidade com as Diretrizes internacionais para o Cuidado e Uso de Mamíferos em Neurociências e Comportamento Pesquisa 6, Após aprovação pelo Animal Care Institucional e Comitê de Uso (Comissão de Avaliação de Uso de Animais los Pesquisa: UFRJ / CAUAP protocolo n DAHEICB 027). As medidas adequadas foram tomadas para minimizar a dor eo desconforto dos animais experimentais.
Agradecimentos
Apoiado pela Fundação de Amparo Pesquisa um do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) e Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Somos gratos aos árbitros anônimos cujos comentários nos ajudaram a melhorar tanto o manuscrito e vídeo.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Cloridrato de ketamina | König | 90-120 mg/Kg | |
| Cloridrato de xilazina | König | 10 mg/Kg | |
| Sulfato de atropina | Isofarma | Isofarma | |
| 6 – Hidroxidopamina Cloridrato | Sigma-Aldrich | 5 μg/μL | |
| Ácido L-ascórbico | USB Corp., Affymetrix | 0,2% | |
| Xylocaine (cloridrato de lidocaína) | AstraZeneca | 5% 50 mg | |
| Nebacetin (sulfato de neomicina + bacitracina) | Altana Pharma | 5 mg/g + 250 Ul/g | |
| Cloridrato de R-(-)-apomorfina | Sigma-Aldrich | 0,5 mg/Kg | |
| Pomada oftálmica GenTeal com hipromelose | Novartis AG | 0,33% | |
| Ibuprofeno | Abbott Laboratories | 4 mg/100 ml de água de bebida | |
| Povidina | Johnson Diversey | ||
| Cloridrato de R-(-)-apomorfina | Sigma-Aldrich | 0,5 mg/Kg |
Referências
- Ungerstedt, U. 6-hydroxy-dopamine induced degeneration of central monoamine neurons. Eur. J. Pharmacol. 5, 107-110 (1968).
- Akerud, P., Canals, J. M., Snyder, E. Y., Arenas, E. Neuroprotection through del....
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Reimpressões e permissões
