Aqui nós mostramos como fazer retro-orbital injeção em peixe-zebra adulto.
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Artigo de método
Retro-orbital de injeção no Zebrafish Adulto
Neste artigo
Resumo
Resumo
Tratamento medicamentoso de animais inteiros é uma ferramenta essencial em qualquer sistema modelo para farmacológicos e químicos estudos genéticos. Injecção intravenosa (IV) é muitas vezes a forma mais eficaz e não invasivo de transporte de um agente de interesse. No peixe-zebra (
Protocolo
Parte 1. Preparação de material de injecção
- Tg (globina: GFP) células:
- Sangrar peixes doadores adultos usando ponteira 10ul revestido em heparina (1unit/ul) para pescar punção por trás de emalhar.
- Aspirar glóbulos vermelhos e dispensar em tampão celular (0.9x PBS + 5% de SFB + 1% Pen / Strep).
- Suspensão de células filtro sobre malha 40uM e determinar a concentração de células usando hemocitômetro como descrito por LeBlanc et al.
- Spin down e ressuspender em tampão celular na concentração desejada de tal forma que o volume de injeção final não é mais do que 5ul. Aqui nós injetar 1,5-2000000 células / destinatá....
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Discussão
Retro-orbital injeção em peixe-zebra adulto dá a maior eficiência de entrega de material injetado na corrente sanguínea com a menor incidência de mortalidade. Devido à natureza do local de injeção, a punção parece curar rapidamente, diminuindo a ocorrência de infecção e da quantidade de perda de sangue. O site pode até ser injetado repetidamente durante um curto período de tempo para injeções diárias de medicamentos, por exemplo.
Grandes quantidades de droga deve ser comprado por métodos tra.......
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Agradecimentos
Este trabalho é apoiado por Howard Hughes Medical Institute e uma concessão do NIH para o estudo da hematopoiese embrionária.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Sal de heparina sódica da mucosa intestinal de suíno | Sigma-Aldrich | 2106 | Frasco pré-pesado de 300 unidades USP |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | |
| Dulbecco’s Solução Salina Tamponada com Fosfato | Invitrogen | 14190-144 | |
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes, Life Technologies | D1830 | |
| E3 | 5 mM NaCl 0,17 mM KCl 0,33 mM CaCl2 0,33 mM MgSO₄2 | ||
| Seringa de microlitros | Hamilton Co | 80300 | 701N 10 µL SYR (26s/2”/2) |
Referências
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal. 37, 26-32 (2008).
- Pinkerton, W., Webber, M.
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Reimpressões e permissões
