Esta técnica permite o uso de alta resolução, ângulo mágico de prótons girando MR espectroscopia (HRMAS 1H-MRS) para a caracterização molecular de viver Drosophila melanogaster Com um espectrômetro convencional 14,1 tesla equipado com uma sonda HRMAS.
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Artigo de método
Espectroscopia de Ressonância Magnética de viver Drosophila melanogaster Usando Angle Spinning Magia
Neste artigo
Resumo
Resumo
Alta Resolução Angle Spinning Magia (HRMAS) espectroscopia de prótons por ressonância magnética (
Protocolo
Parte 1: Preparando-se para Drosophila Medidas HRMAS
- Usando o padrão flylab procedimentos 1, recolher recém eclosing moscas durante 3 dias e transferi-los para voar frascos contendo alimentos fly fresco. Incubar as moscas coletadas por 5 dias para que as moscas se tornará 5-8 dias de idade um pouco antes do experimento. Apenas um sexo (geralmente machos) é usada para experimentos.
- Use saudável, do tipo selvagem intacta voa para comparar com tratados por exemplo, traumatizados ou moscas geneticamente alterados 1.
- Lugar moscas única em tubos de 2ml contendo um pedaço (~ 0,2 ml) de mosca de alimentos 24 horas....
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Discussão
Com exceção do recente relatório sobre a viabilidade de ressonância magnética in vivo em moscas de fruta 6, in vivo MRS estudos em Drosophila ainda não foram relatados. No protocolo, descrevemos a implementação de um romance in vivo HRMAS uma abordagem H-MRS para a detecção de moléculas biologicamente importantes. Especificamente, nós detectamos lipídios e metabólitos em pequena viver Drosophila voa a 14,1 T em aproximadamente 45 min, o que permite tempo.......
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Divulgações
Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pelo Massachusetts General Hospital Institucional animal Comité de Investigação Review Board.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado em parte por um Instituto Nacional de Saúde (NIH) para conceder AI063433 Laurence G. Rahme, um Instituto Nacional Institutes of Health (NIH) Centro de Grant (P50GM021700) para Ronald G. Tompkins (A. Aria Tzika, Diretor de o núcleo de RMN), e um Hospital Shriners para Crianças Bolsa de Investigação (# 8893) para A. Aria Tzika. Agradecemos a Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. de assistência nas fases iniciais de desenvolvimento deste protocolo e Ovidiu C. Andronesi Ph.D. de assistência com a seqüência de pulso TOBSY.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| óxido de deutério | Reagente | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimetilsilil)propiônico-2,2,3,3-d4 ácido | Reagente | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sacarose, levedura, farelo de milho | Alimento | Genesee Scientific | http://www.flystuff.com/ | |
| Moscas Oregon RS ou Canton-S | Linhas de moscas adultas | Centro de Estoque Bloomington | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Pincel | Equipamento | (tamanho 0) | ||
| tubos de 2 ml | Equipamento | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Incubadoras para moscas | Equipamento | alta capacidade de umidade (60-75%), temperatura ajustável e ciclo claro:escuro de 12 h:12 h. | ||
| Espectrômetro de RMN Bruker Bio-Spin Avance (600,13 MHz) com sonda de 4 mm de tripla ressonância (1H, 13C, 2H) Sonda HRMAS | Equipamento | Bruker Corporation | ||
| Unidade BTO-2000 em combinação com uma unidade pneumática MAS | Equipamento | Bruker Corporation | ||
| rotor de óxido de zircônio de 4 mm (capacidade de 50 µl) | Equipamento | Bruker Corporation | B3829 (loja da Bruker) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | Análise de espectros de RMN 1D http://mestrelab.com/ | ||
| SPARKY 3, USCF | Software | Análise de espectros de RMN 2D http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
Referências
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. <....
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Reimpressões e permissões
