Este protocolo de vídeo ilustra o isolamento e cultura de células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) de cordão umbilical humano. Uma vez isolados essas células podem ser usadas em ensaios de angiogênese in vitro como o Gel de fibrina Optimized Bead Assay também demonstrada pelo laboratório Hughes.
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Artigo de método
Isolamento de células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC)
Neste artigo
Resumo
Resumo
A angiogênese é um processo de várias etapas complexas, onde, em resposta a estímulos angiogênicos, novos vasos são criados a partir da vasculatura existente. Estes passos incluem: degradação da membrana basal a proliferação e migração (sprouting) das células endoteliais (CE) na matriz extracelular, o alinhamento da CE em cordas, formação de lúmen, a anastomose, e formação de uma nova membrana basal. Muitos ensaios in vitro têm sido desenvolvidos para estudar este processo, mas a maioria apenas imitar determinadas fases da angiogênese, e morfologicamente os vasos muitas vezes não se assemelham a vasos in vivo. Aqui demonstramos um otimizado ensaio in vitro que utiliza a angiogênese umbilical humano veia CE e fibroblastos. Este modelo recapitula todas as etapas chave no início da angiogênese, e mais importante dos vasos mostrar lumens patente intercelular cercado por CE polarizada. Vasos podem ser facilmente observados por contraste de fase e microscopia de lapso de tempo, e recuperados em forma pura para aplicações a jusante.
Protocolo
Procedimento
- Lay cabo na almofada limpa e dab off excesso de sangue. Fazer cortes frescos em ambas as extremidades do cabo.
- Inserir 21 1 / 2 G agulha com a bainha da agulha de plástico ON, na veia. (A veia é a maior abertura; os 2 menores são artérias)
- Fixar a agulha no lugar com uma pinça hemostática e anexar a seringa 20cc de Hanks para a agulha.
- Empurre a Hanks através da veia com pressão moderada. Recolher os resíduos no recipiente com água sanitária. (Segurando a agulha e cordão com uma mão enquanto empurrando impediria a agulha pulando para fora da veia.) Se há um monte d....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Colagenase 0,1% | 10 mL por cordão, aquecido a 37 °C | ||
| Frascos para cultura de tecidos | T75, um por cordão. | ||
| Meio Hanks | |||
| tesoura | esterilizada | ||
| béquer | esterilizado | ||
| tubos de 50 mL |
Reimpressões e permissões
