A via clássica é ativada por anticorpos e culmina com a lise das células alvo. O CH 50 fornece uma medida da atividade de complemento de uma amostra de soro. Este vídeo mostra os passos envolvidos na determinação do CH 50 De uma amostra de soro, os cálculos e interpretação de resultados.
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Artigo de método
Medir o Complemento de 50% hemolítica (CH 50) Atividade de soro
Neste artigo
Resumo
Resumo
O sistema complemento é um grupo de proteínas que, quando ativado levar a meta a lise das células e facilita a fagocitose através opsonisation. Componentes do complemento individual pode ser quantificado no entanto, este não fornece qualquer informação sobre a atividade da via. O CH
Protocolo
Preparação de Saline Veronal 5x Buffered (VBS)
- Para preparar a solução salina Veronal Buffered (VBS), três soluções distintas precisa estar preparado.
- Prepare uma solução através da dissolução de NaCl e 21.25gm 0.94gm de Barbitone de sódio em 350ml de água destilada. A concentração final de NaCl e de sódio Barbitone são 1,02 e 13mm, respectivamente.
- Prepare a solução 2, dissolvendo 1.44gm de Barbitone em 125ml de água destilada quente. A concentração final de Barbitone é 62,5 mm.
- Prepare a solução 3 dissolvendo 20.33gm de MgCl 2 e 4.41gm de CaCl 2 em 100ml de água destilada. A concentração final de MgCl <....
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Discussão
O CH 50 ensaio está sujeito a muitas interferências. Alguns SRBC são mais frágeis do que outros, resultando em hemólise espontânea que não está relacionado para complementar a atividade. A afinidade do anticorpo de coelho varia de lote para lote e de um fabricante para outro, o que afeta a quantidade de anticorpo que se liga ao SRBC. Além disso, o processo de sensibilização SRBC com resultados de anticorpos em células com diferentes quantidades de anticorpos do revestimento SRBC. Coleta e armazenamento são um.......
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Agradecimentos
O autor gostaria de agradecer a senhorita Lora Matthews para executar a técnica eo Sr. Paul Pastor para a cinematografia. Este projeto foi financiado pela Universidade da Austrália do Sul, Laboratório curso de Medicina.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Hemácias de ovelha | CSL | 2490201 | Usar em concentração final de 1% |
| Soro | Soro humano | ||
| Soro hemolítico anti-ovelha de coelho (HCOs), não conjugado | AbD Serotec | C12HSB | |
| Placa de 96 poços com fundo plano | Sarstedt Ltd | 83.1839 | |
| Solução salina tamponada com veronal | Usar em concentração final 1x | ||
| Banho-maria | |||
| Leitor de placas | |||
| Incubadora/sala a 37°C |
Referências
- Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. Immunology. , W.H. Freeman. (2003).
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Reimpressões e permissões
