Congelamento de nematóides: um método para expor tecidos de vermes internos para coloração

Resumo

Fonte: Zhang, N., et al. O intestino de C. elegans como modelo para morfogênese do lúmen intercelular e biogênese de membrana polarizada in vivo no nível de célula única: marcação por coloração de anticorpos, análise de perda de função de RNAi e imagem. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo descreve o congelamento, um método para tornar os tecidos de C. elegans acessíveis para coloração de anticorpos, interrompendo a cutícula.

Protocolo

Este protocolo é um trecho de Zhang et al, O intestino de C. elegans como modelo para morfogênese de lúmen intercelular e biogênese de membrana polarizada in vivo no nível de célula única: marcação por coloração de anticorpos, análise e imagem de perda de função de RNAi, J. Vis. Exp. (2017).

Coloração de anticorpos do intestino de C. elegans

1. fixação
   1. Pegue uma lâmina de vidro limpa e use poli-L-lisina para gerar uma película fina para as minhocas grudarem. Coloque 30 μL de poli-L-lisina a 0,1-0,2% na lâmina e coloque uma se....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Coloração de anticorpos
poly-L-lysine	sigma	Pág. 5899
Metanol	Fisher Científico	Resposta 452-4
Acetona	Fisher Científico	A949SK-4
Permount	Fisher Científico	SP15-100
Lâminas de microscópio	Fisher Científico	4448
lamínulas de microscópio (22x22-1)	Fisher Científico	12-542-B
M9 Médio			feito em laboratório
OP50 bactérias	CGC