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Artigo de método

Análise de vida útil: medindo a longevidade de C. elegans

5.4K visualizações

⸱

30 de abril de 2023

Neste artigo

Resumo

Fonte: Cornwell, A. B., et al. O Método do Conjunto de Réplicas: Uma Abordagem de Alto Rendimento para Medir Quantitativamente a Vida Útil de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp.(2018).

Este vídeo descreve um método tradicional baseado em placas para medir a vida útil de C. elegans. O protocolo de exemplo mede a vida útil de vermes tratados com RNAi.

Protocolo

O protocolo a seguir é um trecho de Cornwell et al, O Método do Conjunto de Réplicas: Uma Abordagem de Alto Rendimento para Medir Quantitativamente a Vida Útil de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2018).

1. Prevenção da produção de progênie pela adição de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (FUdR)

  1. Cultivar animais até o estágio L4 a 20 °C. Verificar se os animais sincronizados evoluíram para L4 aproximadamente 40 h após a semeadura (etapa 2.1.7).
    NOTA: ....

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Resultados

figure-results-1
Figura 1: O método tradicional e o método do conjunto de réplicas para pontuar a vida útil de C. elegans (A). O método tradicional para pontuar a vida útil de C. elegans. Várias pequenas populações sincronizadas de animais isogênicos por condição são acompanhadas ao longo do tempo. A mesma população de animais é acompanhada durante todo o curso de estu.......

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
FuDR (5-Fluoro-2'-desoxiuridina)Alfa AesarL16497
24 Placas de cultura de poçosGreiner Bio-One#662102
600 μL Placas de 96 poçosGreiner Bio-One#786261
2mL Placas de 96 poçosGreiner Bio-One#780286
replicador de placa de 96 pinosNuncRolamento 250520
C. elegans Biblioteca de clones de RNAi em bactérias HT115- AhringerFonte: BiociênciaColeção de RNAi de C. elegans (Ahringer)Ver também Kamath et. al, Nature 2003.
C. elegans Biblioteca de clones de RNAi em bactérias HT115- VidalFonte: BiociênciaRecurso ORF-RNAi de C. elegans (Vidal)Veja também Rual et. al, Genome Research 2004. Esta biblioteca também está disponível na Dharmacon.
L4440 Plasmídeo vetorial vazioAddgene1654https://www.addgene.org/1654/

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