Análise de vida útil: medindo a longevidade de C. elegans

Abstract

Fonte: Cornwell, A. B., et al. O Método do Conjunto de Réplicas: Uma Abordagem de Alto Rendimento para Medir Quantitativamente a Vida Útil de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp.(2018).

Este vídeo descreve um método tradicional baseado em placas para medir a vida útil de C. elegans. O protocolo de exemplo mede a vida útil de vermes tratados com RNAi.

Protocol

O protocolo a seguir é um trecho de Cornwell et al, O Método do Conjunto de Réplicas: Uma Abordagem de Alto Rendimento para Medir Quantitativamente a Vida Útil de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2018).

1. Prevenção da produção de progênie pela adição de 5-Fluoro-2'-desoxiuridina (FUdR)

1. Cultivar animais até o estágio L4 a 20 °C. Verificar se os animais sincronizados evoluíram para L4 aproximadamente 40 h após a semeadura (etapa 2.1.7).
   NOTA: ....

Results

Figura 1: O método tradicional e o método do conjunto de réplicas para pontuar a vida útil de C. elegans (A). O método tradicional para pontuar a vida útil de C. elegans. Várias pequenas populações sincronizadas de animais isogênicos por condição são acompanhadas ao longo do tempo. A mesma população de animais é acompanhada durante todo o curso de estu.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
FuDR (5-Fluoro-2'-desoxiuridina)	Alfa Aesar	L16497
24 Placas de cultura de poços	Greiner Bio-One	#662102
600 μL Placas de 96 poços	Greiner Bio-One	#786261
2mL Placas de 96 poços	Greiner Bio-One	#780286
replicador de placa de 96 pinos	Nunc	Rolamento 250520
C. elegans Biblioteca de clones de RNAi em bactérias HT115- Ahringer	Fonte: Biociência	Coleção de RNAi de C. elegans (Ahringer)	Ver também Kamath et. al, Nature 2003.
C. elegans Biblioteca de clones de RNAi em bactérias HT115- Vidal	Fonte: Biociência	Recurso ORF-RNAi de C. elegans (Vidal)	Veja também Rual et. al, Genome Research 2004. Esta biblioteca também está disponível na Dharmacon.
L4440 Plasmídeo vetorial vazio	Addgene	1654	https://www.addgene.org/1654/