Artigo de método

Digestão enzimática e dissociação manual: um método para preparar embriões de C. elegans para cultura de células

30 de abril de 2023

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Sangaletti, R. e Bianchi, L. Um método para cultura de células embrionárias de C. elegans.J. Vis. Exp.(2013).

Este vídeo apresenta um método para isolar e cultivar células embrionárias de C. elegans in vitro para isolar e cultivar estérilmente.

Protocolo

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1. Dissociação de células embrionárias

  1. Conduza as próximas etapas do procedimento em condições estéreis usando uma capela de fluxo laminar. Enquanto os animais são vestidos em placas de bactérias, as lavagens e o tratamento com a solução de lise contendo alvejante devem eliminar a maioria, senão todas as bactérias. Assim, o uso de uma capela laminar neste ponto do procedimento evita uma nova contaminação da suspensão do ovo.
  2. Ressuspenda os ovos peletizados em 1 ml de quitinase 2 mg/ml (estoque em tampão de ovo pH 6,5) e transfira-os para um novo tubo cônico estéril de 15 ml. Balance o tubo por 10-30 min em temperatura ambiente. O....

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Resultados

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Figura 1. Embriões de C. elegans antes e após o tratamento com quitinase. (A) Fotografia de ovos antes da exposição à quitinase. A seta aponta para a casca de ovo transparente e intacta ao redor de um embrião. (B) Ovos tratados com quitinase por 10 min. As cascas dos ovos foram digeridas e não são mais visíveis ao redor dos embriões. As setas ap.......

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
REAGENTS
L-15 Medium (1x) Líquido de LeibovitzInvitrogen11415-064
Fetal Soro BovinoInvitrogenRolamento 16140-063
Penicilina-estreptomicinasigmaPág. 4333-100ML
Quitinase de Streptomyces GriseussigmaC6137-25UN
Lectina de amendoimsigmaL0881-10MG
EQUIPAMENTO
101-1000 μl Pontas de pipeta graduadas azuisEUA ScentificRolamento 1111-2821
10 ml Pipeta Esterilizada Embalada IndividualmenteEUA Scentific1071-0810
Volume variável ergonômico (100-1000 μl) Pipetador com ejetor de pontaVWR International Inc.89079-974
Auxiliar de pipeta portátil, DrummondVWR International Inc.Rolamento 53498-103
Transfer Plastic Pipet SterileVWR International Inc.14670-114
15 ml Tubo cônicoEUA Scentific1475-1611
Agulhas estéreis de calibre 18Becton, Dickinson e Cia.305196
Seringas estéreis de 10 mlBecton, Dickinson e Cia.305482
Filtros de seringa de plástico Corning Tamanho de poro de 0,20 μmCorning431224
Filtro de seringa Acrodic de 25 mm com membrana versapor de 5 μmVWR International Inc.Rolamento 28144-095
60x15 mm Placa de Petri EstérilVWR International Inc.82050-548
100x15 mm Placa de Petri EstérilVWR International Inc.82050-912
12 mm de diâmetro lamínulas de vidroVWR International Inc.Rolamento 48300-560
Placas de Cultura de Células Transparentes 24 Poços Fundo Plano com tampaThomas científicoNº 6902A09
Dumont #5- Fórceps FinoFerramentas de Belas Ciências11254-20
Centrífuga 5702Eppendorf22629883
Capuz de fluxo laminar
Microscópio invertido com objetiva x10
Incubadora umidificada de ar ambiente

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