Evolução adaptativa de bactérias usando um sistema de cultura de microgotículas microbianas

Abstract

Fonte: Jian, X., et al., Cultivo Microbiano Automatizado e Evolução Adaptativa usando o Sistema de Cultura de Microgotículas Microbianas (MMC). J. Vis. Exp. (2022).

Este vídeo demonstra o uso de um sistema de cultura de microgotículas microbianas para impulsionar a evolução adaptativa das bactérias em direção à tolerância ao metanol. Ao misturar culturas bacterianas modificadas com um meio de estresse de alto teor de metanol e segmentá-las em microgotículas, o sistema seleciona mutantes que exibem crescimento aprimorado sob estresse de metanol. Por meio de ciclos de enriquecimento iterativos e isolamento de colônias, cepas bacterianas adaptadas ao metanol são cultivadas para análise ou aplicação posterior.

Protocol

Evolução adaptativa em MMC

1. Preparação para a solução bacteriana inicial
   1. Siga os regulamentos padrão relacionados para preparar o meio líquido especial e as placas sólidas para o MeSV2.2 e autoclave a 121 °C por 15 min.
   2. Cultive o MeSV2.2 usando a placa sólida (diâmetro = 90 mm) em uma incubadora de temperatura constante a 37 °C por 72 h. Em seguida, escolher uma colónia independente e cultivá-la num balão agitado de 50 ml com 10 ml do meio líquido especial numa incubadora agitável (200 rpm) a 37 °C durante 72 h.
   3. Diluir a solução cultivada de MeSV2.2 com o meio até um OD₆₀₀ de 0,1-0,2 (garantir qu....

Results

Figura 1: Interface do software de operação do MMC. (A) A interface principal do software. (1) Temperatura na câmara de operação. (2) Valor do sinal fotoelétrico do reconhecimento de gotículas. Quando a gota passa, o va.......

Materials