Evolução adaptativa de bactérias usando um sistema de cultura de microgotículas microbianas

Resumo

Fonte: Jian, X., et al., Cultivo Microbiano Automatizado e Evolução Adaptativa usando o Sistema de Cultura de Microgotículas Microbianas (MMC). J. Vis. Exp. (2022).

Este vídeo demonstra o uso de um sistema de cultura de microgotículas microbianas para impulsionar a evolução adaptativa das bactérias em direção à tolerância ao metanol. Ao misturar culturas bacterianas modificadas com um meio de estresse de alto teor de metanol e segmentá-las em microgotículas, o sistema seleciona mutantes que exibem crescimento aprimorado sob estresse de metanol. Por meio de ciclos de enriquecimento iterativos e isolamento de colônias, cepas bacterianas adaptadas ao metanol são cultivadas para análise ou aplicação posterior.

Protocolo

Evolução adaptativa em MMC

1. Preparação para a solução bacteriana inicial
   1. Siga os regulamentos padrão relacionados para preparar o meio líquido especial e as placas sólidas para o MeSV2.2 e autoclave a 121 °C por 15 min.
   2. Cultive o MeSV2.2 usando a placa sólida (diâmetro = 90 mm) em uma incubadora de temperatura constante a 37 °C por 72 h. Em seguida, escolher uma colónia independente e cultivá-la num balão agitado de 50 ml com 10 ml do meio líquido especial numa incubadora agitável (200 rpm) a 37 °C durante 72 h.
   3. Diluir a solução cultivada de MeSV2.2 com o meio até um OD₆₀₀ de 0,1-0,2 (garantir qu....

Resultados

Figura 1: Interface do software de operação do MMC. (A) A interface principal do software. (1) Temperatura na câmara de operação. (2) Valor do sinal fotoelétrico do reconhecimento de gotículas. Quando a gota passa, o va.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Metanol	MACKLIN	M813895	Componente do meio especial para MeSV2.2.
Sistema de Cultura de Microgotículas Microbianas (MMC)	Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.	MMC-I	Realização de determinação da curva de crescimento e evolução adaptativa. Consulte http://www.tmaxtree.com/en/index.php?v=news&id=110
Chip microfluídico	Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.	MMC-ALE-OD	Para várias operações de gotículas. Consulte http://www.tmaxtree.com/en/
Óleo MMC	Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.	MMC-M/S-OD	A fase oleosa para microfluídica de gotículas. Consulte http://www.tmaxtree.com/en/
Placa de Petri	Corning Incorporada	90 milímetros	Para a preparação de meio sólido
Pipeta	Eppendorf	2,5 μL, 10 μL, 100μL, 1000μL	Para manuseio de líquidos
Conector rápido A	Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.	—	Para a conexão de cada junta. Consulte http://www.tmaxtree.com/en/
Frasco de reagente	Luoyang TMAXTREE Biotechnology Co., Ltd.	MMC-PCB	Amostragem e armazenamento de solução bacteriana e reagentes. Consulte http://www.tmaxtree.com/en/
Agitar balão	União-Biotecnologia	50 mL	Para cultivo microbiano
Incubadora de agitação	Shanghai Sukun Industrial Co., Ltd.	SKY-210 2B	Para o cultivo microbiano em frasco agitado
Sulfato de estreptomicina	Solarbio	S8290	Componente do meio especial para MeSV2.2.
Seringa	JIANGSU ZHIYU MEDICAL INSTRUCTMENT CO., LTD	10 mL	Retire o líquido e injete-o no frasco de reagente
Agulha de seringa	Loja de ferragens OUBEL	22G	O diâmetro interno é de 0,41 mm e o diâmetro externo é de 0,71 mm.