Preparação de uma Placa Microfluídica com Células Bacterianas

Neste artigo

Resumo

Fonte: Sutlief, A. L., et al. Análise de Células Vivas do Estresse de Cisalhamento em Pseudomonas aeruginosa usando um sistema microfluídico automatizado de maior rendimento. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo demonstra a preparação de uma placa microfluídica para estudos de tensão de cisalhamento em culturas bacterianas. Após a preparação dos canais com meio, as células bacterianas são introduzidas no canal experimental e incubadas para a fixação. Meios residuais e culturas são removidos para preparar o sistema para experimentos subsequentes de tensão de cisalhamento.

Protocolo

1. Preparação para a Mídia

Prepare um substrato mínimo (MM) com 0,25% de glicose. Para produzir 1 L de MM com 0,25% de glicose, adicione 200 mL de solução estéril de sal M9, 2 mL de sulfato de magnésio estéril de 1 M (MgSO₄), 100 μL de cloreto de cálcio estéril de 1 M (CaCl₂) e 12,5 mL de glicose estéril de 20% (p/v) em água (_{dH 2}O) em volume final de 1 L.
Transfira o meio necessário para um frasco estéril usando técnicas estéreis. Prepare a quantidade necessária dependendo do número de canais utilizados. Tipicamente, cada canal requer 200 μL para preparação, 300 μL para semeadura e 1300 μL para o experimento de 24 horas....

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Resultados

Figura 1: Componentes individuais do Sistema Microfluídico. Os componentes individuais são listados da esquerda para a direita: 1. Câmera CCD, 2. Microscópio Invertido de Alta Resolução com Estágio Automatizado, Módulo de Fluorescência Auto.......