O exercício é capaz de induzir a apoptose em células do sistema imunológico. Existem limitações de medição diversos, particularmente relacionadas com a quantidade de tempo necessário para isolar e tratar uma amostra de sangue antes da avaliação. Demonstrado é um procedimento rápido e minimamente invasivo para a análise do exercício apoptose induzida por linfócitos.
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Artigo de método
Ponta de dedo Metodologia de amostragem de sangue para a determinação da apoptose induzida pelo exercício de Linfócitos
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Exercício é um estímulo fisiológico capaz de induzir a apoptose em células do sistema imunológico. Até à data, várias limitações foram identificadas com a medição deste fenômeno, particularmente em relação à quantidade de tempo necessário para isolar e tratar uma amostra de sangue antes da avaliação da morte celular. Devido a isso, é difícil determinar se os aumentos relatados em apoptose de células imunes podem ser contribuíram para o efeito real do exercício sobre o sistema, ou são um reflexo do tempo e de processamento necessário para, eventualmente, obter esta medida. Neste artigo vamos demonstrar um procedimento rápido e minimamente invasivo para a análise da apoptose induzida pelo exercício de linfócitos. Ao contrário de outras técnicas, o sangue total é adicionado a um painel de anticorpos imediatamente após a obtenção de uma amostra. Após o período de incubação, as hemácias são lisadas e as amostras estão prontas para serem analisados. O uso de um procedimento de amostragem ponta de dedo reduz o volume de sangue necessário, e minimiza o desconforto para o indivíduo.
Protocolo
1. Dedo-Stick coleta de sangue
- Coleta de sangue total é normalmente tomadas em repouso por uma base de referência (normalmente após 10-15 min de repouso sentado), durante ou imediatamente após uma sessão de exercícios, e durante todo o período pós-exercício (geralmente de 1-3 horas após a interrupção do exercício).
- Utilizando precauções universais, primeiro esterilizar a ponta do dedo com 70% de álcool isopropílico.
- Punção, próximo do local usando uma lanceta automatizado ou dispositivo similar. Apesar de usarmos uma lanceta de calibre 30 para fornecer para o conforto assunto, uma agulha de maior calibre podem ser utilizados.
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Discussão
Um procedimento de coleta de amostra e minimamente invasiva posterior análise é demonstrado para a análise das fases precoce e tardia da apoptose induzida pelo exercício de linfócitos. Também é possível excluir aqueles claramente células, que são necróticas, e não apoptóticas. Este procedimento supera os inconvenientes e desconforto associado a punção venosa invasoras da região antecubital em momentos múltiplos antes, durante e imediatamente após o exercício, ou conseguir um cateter para a duração da sessão de exercício.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Esta pesquisa foi suportada por um Grant Faculdade Nova do Conselho de Bolsas da Faculdade de Western Kentucky University.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Tampão de Ligação para Citometria de Fluxo | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| Tampão de Lisise de Hemácias | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| Dispositivo Lanceta | Accu Check Soft Touch | Roche Group | ||
| Tubos capilares | Tubos capilares heparinizados | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| Centrífuga | GmC Lab | Gilson, Inc. | PMS-880 | |
| Anexina V-FITC Conjugada | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE Conjugado | Anti-humano, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE Conjugado | Anti-humano, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE Conjugado | Anti-humano, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| Solução de Coloração com 7-AAD para Viabilidade | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC Conjugado | Anti-humano, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| Citômetro de fluxo | C6 | Accuri |
Referências
- Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans. Res. Sports Med. 15, 157-174 (2007).
- Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K.
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Reimpressões e permissões
