Artigo de método

Micro-dissecção de cérebro de um rato para RNA ou Extração de Proteína da região específica do cérebro

DOI:

10.3791/269

⸱

30 de agosto de 2007

 ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine, The University of Hong Kong - HKU

Neste artigo

Resumo

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Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.

Resumo

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Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.

Protocolo

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Passo 1

Sacrificar o rato de acordo com protocolos estabelecidos. Remover o cérebro do crânio e lave-o em gelo frio DEPC tratados água Milli Q para remover qualquer vestígio de sangue de superfície.

Passo 2

Coloque no prato de metal frio. Cortar o cérebro bi meio em hemisfério direito e esquerdo.

figure-protocol-1

Figura 1. As posições de corte do ponto de vista medial do hemisfério rato

Passo 3

Recolher o bulbo olfatório logo após o primeiro corte. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

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Figura 2. Dissecção bulbo olfatório

Passo 4

Recolher o córtex frontal direito, após o segundo corte, usando uma lâmina e um Dumont No. 5 fórceps. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

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Figura 3. Dissecção córtex frontal

Passo 5

Recolher o striatum (núcleo caudado) logo após o terceiro corte com a ajuda de duas pinças de Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

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Figura 4. Estriado dissecção (núcleo caudado)

Passo 6

Para coletar o hipocampo, coloque o lado ventral do cérebro para cima e depois remover mesencéfalo para expor o hipocampo. Dissecar o hipocampo do córtex utilizando duas pinças Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

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Figura 5. Dissecção hipocampo

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Discussão

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Diferentes regiões do cérebro associada com diferentes doenças neurodegenerativas. Por exemplo, córtex frontal e striatum se relacionam com a doença de Parkinson, enquanto o hipocampo se relaciona com a doença de Alzheimer. Micro-dissecção precisa do cérebro que nos permite detectar as alterações mRNA e proteína na região de doentes com mais precisão.

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Divulgações

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Os animais foram tratados de acordo com o protocolo para o uso de animais em pesquisa aprovada pelo Comitê sobre o Uso de Animais Vivos em Ensino e Pesquisa (CULATR) na Universidade de Hong Kong e de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para uso animal.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
MicroscópioOlympus Corporation
Ferramentas de dissecaçãoPlaca de metal, pinça, lâmina, etc. Embaladas individualmente com folha de alumínio e aquecidas a 180 °C por oito horas para eliminar RNase. Resfriadas em gelo antes do uso.

Referências

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  1. Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
  2. Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).

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Reimpressões e permissões

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