Trichuris Muris infecção intestinal é um modelo de imunidade Th2 onde os ratos resistentes ao gerar uma resposta protetora Th2 e camundongos suscetíveis de gerar uma resposta Th1 patológico.
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Artigo de método
Trichuris Muris Infecção: Um Modelo de imunidade do tipo 2 e inflamação no intestino
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Trichuris Muris é um patógeno natural de ratos e é biologicamente e antigenicamente semelhante a espécies de Trichuris que infectam seres humanos e animais 1. Ovos infectantes são dadas por gavagem oral, escotilha no intestino delgado distal, invadem as células epiteliais intestinais (CIEM) que revestem as criptas do ceco e cólon proximal e sobre a maturação dos vermes liberam os ovos no ambiente 1. Este modelo é uma ferramenta poderosa para analisar os fatores que a ativação de células CD4 controle + T helper (Th), bem como alterações no epitélio intestinal. A resposta imune que ocorre em cepas resistentes puras, tais como C57BL / 6 e BALB / c, é caracterizada por citocinas Th2 polarizada (IL-4, IL-5 e IL-13) e expulsão de vermes enquanto Th1 associado citocinas (IL -12, IL-18, IFN-γ) promover infecções crônicas em AKR geneticamente suscetíveis / mice J 2-6. Citocinas Th2 promover mudanças fisiológicas no microambiente intestinal incluindo rotatividade de IECs, a diferenciação de células caliciformes, recrutamento e alterações na permeabilidade epitelial e contração do músculo liso, as quais têm sido implicados na expulsão verme 15/07. Aqui detalhamos um protocolo para a propagação de ovos de Trichuris Muris que pode ser usado em experimentos posteriores. Nós também fornecemos uma colheita de amostra experimental com sugestões para análise pós-infecção. Globalmente, este protocolo irá fornecer aos pesquisadores as ferramentas básicas para realizar uma Trichuris Muris modelo de infecção do mouse que podem ser utilizados para tratar questões relativas à propensão Th no trato gastrointestinal, bem como as funções efectoras imunes de IECs.
Protocolo
1. Propagação ovos de Trichuris Muris
- Para gerar novos lotes de ovos de Trichuris Muris, 20-30 infectar camundongos imunodeficientes (ex. NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) ou 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 - / -)) ou camundongos geneticamente suscetíveis ( por exemplo. AKR / J), que são de 6-8 semanas de idade com cerca de 300 ovos de Trichuris Muris por gavagem oral.
- Depois de 32-35 dias sacrifício dos camundongos por asfixia CO 2.
- Expor o lado ventral do mouse e molhar o abdômen com álcool 70%.
- Forceps usando agarrar a pele abdominal ....
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Discussão
Este protocolo detalhes um alto padrão dose aguda Trichuris Muris infecção que pode ser modificado conforme exigido pelo investigador. Por exemplo, ratos podem ser sacrificados e os tecidos colhidas em dias diferentes. Para determinar que os ratos com sucesso estabelecida carga parasitária total que pode ser sacrificada no dia 14, altura em que todos os camundongos deve levar uma carga de aproximadamente 200 worms. Ratos também podem ser infectados por 32 dias, onde qualquer worm detectado terá atingido maturid.......
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Divulgações
Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela The University of British Columbia.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (MSH-95368, 89773 e MOP-MOP-106623 para CZ) e da Fundação Canadense para a Inovação. SCM é o destinatário de uma Associação CIHR / canadense de Gastroenterologia pós-doutorado. CZ é um investigador CIHR Novo.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | Comentários |
| Animais Agulhas Alimentação (18 x 1 ½ ") | Popper | 7912 | |
| Pinça curva suave | Roboz | RS-5047 | |
| DMEM | Gibco | 11965 | |
| NOD.Cg-Prkdc scid Il2r gtm1Wjl / SzJ (NSG) | Jackson Laboratories | 005557 | Estes são os ratos que usamos, no entanto, qualquer camundongos imunodeficientes ou linhagem suscetível deve funcionar. |
| RNAlater | Qiagen | 76104 | |
| 2 tubos de ml | Axygen | MCT-200-C | |
| Tubos de 15 ml | Falcão | 352096 | |
| 6 placas bem | Falcão | 353046 | |
| Paraformaldeído | Electron Microscopy Ciência | 15710 | |
| α-RELMβ anticorpos | PeproTech Inc | 0694270Rb |
Referências
- Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
- Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cyt....
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Reimpressões e permissões
