Análise quantitativa de metástase de câncer utilizando um modelo de Embrião aviária

Resumo

Usando PCR quantitativo, demonstramos como o bem-estabelecida pinto modelo CAM pode ser usado para analisar quantitativamente a metástase de células tumorais para órgãos distantes.

Resumo

Durante as células do câncer disseminar metástases do tumor primário, invade os tecidos em volta, e se espalhou para órgãos distantes. Metástase é um processo complexo que pode envolver muitos tipos de tecido, períodos de tempo variável extensão, e muitas vezes ocorrem profundamente dentro dos órgãos, o que torna difícil para investigar e quantificar. Além disso, a eficácia do processo metastático é influenciado por várias etapas da cascata metastática que torna difícil avaliar a contribuição de um único aspecto do comportamento de células tumorais. Como conseqüência, os ensaios metástases são freqüentemente realizados em animais experimentais para fornecer um contexto necessariamente realistas para estudar metástase. Infelizmente, estes modelos são ainda mais complicada pela sua complexa fisiologia. O embrião de galinha é um exclusivo modelo in vivo que supera muitas limitações para estudar metástase, devido à acessibilidade da membrana corioalantóide (CAM), um tecido bem vascularizado extra-embrionárias localizado por baixo da casca do ovo que está receptivo à xeno-enxerto de células tumorais (figura 1). Além disso, desde o embrião de galinha é, naturalmente, imunodeficientes, o CAM prontamente suporta o enxerto de tecidos normais e tumorais. Mais importante, a CAM aviária com sucesso suporta características celulares mais câncer incluindo o crescimento, invasão, angiogênese e remodelação do microambiente. Isso faz com que o modelo extremamente útil para a investigação das vias que levam à metástase do câncer e para prever a resposta do câncer metastático de novas terapêuticas potenciais. A detecção de células divulgada pela espécie-específicos Alu PCR torna possível avaliar quantitativamente a metástase em órgãos que são colonizados por apenas 25 células. Usando a linha de células carcinoma epidermóide Humanos (HEp3) usamos esse modelo para analisar a metástase espontânea de células cancerosas para órgãos distantes, incluindo o fígado e pulmão pinto. Além disso, usando o protocolo Alu-PCR que demonstram a sensibilidade ea reprodutibilidade do ensaio como uma ferramenta para analisar e quantificar intravasation, parada, extravasamento, colonização e como elementos individuais de metástases.

Protocolo

1. Preparar os ovos para xeno (metástase espontânea)

1. Recém-punham ovos de galinha fertilizados são incubados em uma incubadora rotativa por 10 dias a 100 ° F e umidade de 60%. Os ovos são rodados quatro vezes a cada hora.
2. No dia 10 de desenvolvimento dos ovos são colocados ao seu lado em um rack de ovo. Uma fonte de luz pescoço de ganso lâmpada ou outro material adequado é usado para vela os ovos brilhando a luz para a casca de ovo no final blunt do ovo onde o airsac está localizado.
3. A veia corioalantóicas está localizado e marcado. Esta veia é localizada na parte superior da casca do ovo onde é a junção de vários grandes vasos sanguíne....

Discussão

O CAM pinto tem sido utilizada há décadas como um sistema modelo para estudar vários aspectos da biologia e progressão do câncer metastático. Avaliação princípio da capacidade metastática foram realizados neste modelo por uma variedade de grupos, incluindo a análise de dormência (Aguirre Ghiso et al, 1999;. Ossowski e Reich, 1983), remodelação do tecido (Deryugina et al, 2005;. Hahn-DANTONA . et al, 1999), e metástase (Zijlstra et al, 2008;. Zijlstra et al, 2002).. Ele contin.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Nome do reagente	Companhia	Número de catálogo	Comentários (opcional)
Modificado 1X Dulbecco Eagle Medium (DMEM)	Invitrogen	11995073
Dulbecco tampão fosfato (D-PBS) (1X), líquido	Invitrogen	14190250	pH 7,4
Tripsina, 0,05% (1X) com EDTA 4NA, líquido	Invitrogen	25300054
Sportsman nascedouro	Berry Hill	1550HA	Estas incubadoras são alguns dos mais prontamente disponíveis. No entanto, o vídeo vai mostrar diferentes equipamentos.
Sportsman incubadora	Berry Hill	1502EA
Ferramenta rotativa Dremel	Dremel
Rodas de corte Dremel não. 36	Dremel	409
Ajuda Pipetar portáteis	Pescador	1368115E
Derrubado Aplicadores de algodão	Pescador	23-400-001)
Ovos fertilizados	Vários		Fornecedor diferente muitos podem ser usados. Os ovos devem ser de aproximadamente 35-55 gramas. As galinhas que estabelece-los deve ser entre 36 e 55 semanas de idade.
Hemocitômetro	Hausser Scientific, VWR	15170-090
Iluminador de fibra óptica de microscópio	Amscope	HL250-AY	150W
Agulha de calibre 25
SYBR Green Extract-N-Amp PCR Tissue Kit	Sigma-Aldrich	XNATRG