Introdução à Técnica Destruição Ultrasound Targeted microbolhas

Resumo

Destruição de ultra-som Targeted microbolhas (UTMD) pode ser usado para direcionar site-specific entrega de moléculas bioativas, incluindo genes terapêuticos, para órgãos-alvo acessível ao ultra-som, como o coração eo fígado ^06/01.

Resumo

Em UTMD, moléculas bioativas, tais como vetores de DNA carregados negativamente plasmídeo codificando um gene de interesse, são adicionados às conchas de lipídios catiônicos agentes de contraste de microbolhas ^7-9. Em camundongos essas microbolhas vetor carregando pode ser administrado por via intravenosa ou diretamente para o ventrículo esquerdo do coração. Em animais maiores também podem ser infundido através de um cateter intracoronário. A entrega posterior da circulação de um órgão-alvo ocorre por cavitação acústica em uma freqüência de ressonância de microbolhas. Parece provável que a energia mecânica gerada pelos resultados destruição das microbolhas na formação dos poros transitórios ou entre as células endoteliais da microvasculatura da região de destino ^10. Como resultado deste efeito sonoporação, a eficiência de transfecção em e através de células endoteliais é reforçada, e transgene codificação de vetores são depositados no tecido circundante. DNA plasmídeo restantes na circulação é rapidamente degradado por nucleases no sangue, o que reduz ainda mais a probabilidade de entrega para não-tecidos e sonicado leva a altamente específico transfecção de órgãos-alvo.

Protocolo

1. Preparação de microbolhas

1. Em 10 ml de PBS misturar 200 mg 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolina e 50 mg 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidiletanolamina com 1 g de glicose.
2. Aqueça a mistura em ebulição água do banho de 20-30 minutos, pipetar mistura a cada 5 minutos.
3. A solução pode ser armazenada a 4 ° C por até 6 meses.

2. Preparação de microbolhas

1. Dê uma mL 250 da solução estoque preparada microbolhas e incubar a 40 ° C por 15 minutos.
2. A solução pré-aquecido microbolhas é então transferido para um microtubo 1,5 mL contendo 50 mL de glicerol.
3. 1-2 mg de DNA p....

Discussão

UTMD representa uma nova abordagem para a entrega do gene. Como uma tecnologia de plataforma que pode ser combinado com qualquer uma das muitas estratégias de terapia potencial gene, para entregar uma miríade de moléculas bioativas quando um alto grau de especificidade do tecido é desejado. A principal limitação biológica da técnica é a baixa eficiência de transfecção. Outra consideração importante é a acessibilidade do órgão alvo ao ultra-som, que pode ser acentuada diminuição, intervindo osso ou ar. A técnica exige a .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Nome do reagente / equipamentos	Companhia	Número de catálogo	Comentários
1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolina	Sigma-Aldrich	P-5911	componente do shell de lipídios microbolhas
1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidiletanolamina	Sigma-Aldrich	P-3275	componente do shell de lipídios microbolhas
glicose	Sigma-Aldrich	G5400	pensamento para estabilizar as microbolhas
tampão fosfato	Sigma-Aldrich	P5368
glicerina	Sigma-Aldrich	G5516	Acredita-se evitar microbolhas de coalescência
Gás Octafluoropropane	Airgas	N / A	gás inerte utilizado em aplicações clínicas
Vialmix dental amalgamador	Bristol-Myers Squibb	N / A
1 MHz, transdutor, 13 milímetros unfocused	Olimpo	A303S-SU
Função 20 MHz / Gerador de Formas de Onda Arbitrárias	Agilent	33220A
Amplificador de potência	Krohn-Hite Co.	Modelo 7500
Hidrofone	Bruel e Kjaer	Tipo de 1803
Amplificador de carga	Bruel e Kjaer	Tipo de 2634
500 MHz Osciloscópio	LeCroy	9354L
Vevo VisualSonics "Imaging System 2100 com 34 MHz.	VisualSonics	2100
27G cateteres uma veia da cauda polegadas	VisualSonics	N / A
Genie Além disso bomba de infusão	Kent Scientific	GENIE