Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Anestesia e cirurgia em animais
- Pese e anestesie o camundongo com o regime de anestesia aprovado pelo comitê local de cuidados com os animais.
- Faça uma pinça da cauda ou do dedo do pé com uma pinça para confirmar a anestesia profunda antes da cirurgia.
- Posicione o mouse em um aparelho estereotáxico e fixe sua cabeça.
- Aplique pomada para os olhos em ambos os olhos para mantê-los úmidos. Siga as diretrizes locais de cuidados com os animais em relação à analgesia pré e pós-operatória.
- Raspe o cabelo usando uma tesoura cirúrgica. Faça uma pequena incisão (12-15 mm) no meio da área cirúrgica exposta com uma tesoura. Usando uma pinça, puxe suavemente o couro cabeludo para longe da linha média.
- Separe a pele suavemente e remova o tecido residual. Limpe o crânio usando cotonetes revestidos de peróxido de hidrogênio.
- Faça dois pequenos orifícios de raios de 1,0-1,5 mm nos lados esquerdo e direito do crânio para permitir que os microeletrodos de registro sejam inseridos nas regiões M2 sob um estereomicroscópio (Figura 1A).
nota: Localizações estereotáxicas de M2 bilateral: 1,94 mm anterior ao bregma, 1,0 mm lateral à linha média e 0,8-1,1 mm ventral à dura-máter.
- Remova a dura-máter cuidadosamente com uma agulha de tungstênio.
- Puxe micropipetas de borossilicato de vidro (diâmetro externo: 1.0 mm) como microeletrodos de registro com resistência de 1-2 MΩ.
- Insira dois microeletrodos de gravação separados preenchidos com NaCl 0.5 M nos orifícios usando micromanipuladores mecânicos (a 60°, Figura 1B).
2. Registros LFP em M2 bilateral de camundongos
- Abaixe os eletrodos de vidro esquerdo e direito lentamente nas coordenadas apropriadas de M2 bilateral (Figura 1C).
- Para controle de qualidade, teste a resistência de cada eletrodo usando o amplificador diferencial antes de capturar LFPs.
- Defina o processo de gravação em passa-alta de 0,1 Hz e passa-baixa de 1.000 Hz com amplificação de 1.000x.
- Colete dados brutos digitalizados de LFP de pelo menos 60 s de atividades espontâneas em um estado estável, com camundongos respirando uniformemente a uma frequência respiratória de 2 respirações por segundo sob anestesia.
- Após a gravação, levante lentamente os eletrodos para fora do cérebro e, em seguida, eutanasiará os camundongos por deslocamento cervical rápido.
- Salve os dados e analise-os offline.
