Gerando um modelo de rato de glioblastoma

Resumo

Fonte: Bolcaen, J., et. al., irradiação guiada por PET e ressonância magnética de um modelo de rato com glioblastoma usando um micro-irradiador. J. Vis. Exp. (2017)

Este vídeo demonstra o procedimento para estabelecer um modelo de rato glioblastoma injetando estereotaticamente células de glioblastoma causadoras de tumor cerebral no córtex pré-frontal.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Modelo de célula de rato F98 GB

1. Cultive as células F98 GB, obtidas do ATCC, em monocamadas usando o meio Eagle modificado de Dulbecco, 10% de soro de bezerro, 1% de penicilina, 1% de estreptomicina, 1% de L-glutamina e 0,1% de anfotericina b, e coloque em uma incubadora de CO₂ (5% CO₂ e 37 °C).
2. Inocular as células de glioma no cérebro de ratos Fischer F344 fêmeas (peso corporal de 170 g).
   1. Use instrumentos estéreis e luvas estéreis o tempo todo.
   2. Anestesiar os ratos injetando uma mistura de 74 mg / kg de cetamina e 11 mg / kg de xilazina por via intraperitoneal (IP) com uma seringa de insulina (1 mL, 29 G). Confirme a anestesia pela ausência de resposta ao reflexo de retirada do membro. Imobilize os ratos em um dispositivo estereotáxico usando pontos de fixação para o nariz e as orelhas. Coloque um gel de carbômero para os olhos para evitar o ressecamento dos olhos durante a anestesia.
   3. Raspe o rato do nível dos olhos até a parte de trás do crânio e desinfete a pele com iodopovidona.
   4. Exponha o crânio através de uma incisão no couro cabeludo na linha média de 2 cm e faça um orifício de 1 mm (broca diamantada) 2 mm posterior e 2,5 mm lateral ao bregma no hemisfério frontal direito.
   5. Insira uma agulha de insulina guiada estereotaticamente (29 G) e injete uma suspensão de células de 5 μL (20.000 células F98 GB) com 3 mm de profundidade usando um controlador de bomba de microseringa (configurações: injetar (I50), taxa 1 nL / s (001 SDN)).
   6. Retire a seringa lentamente e feche a incisão com cera óssea. Suture a pele e desinfete-a com iodopovidona.
   7. Estabilize a temperatura corporal do animal após a cirurgia usando uma lâmpada vermelha. Monitore o despertar do rato até que ele recupere a consciência suficiente para manter a decúbito esternal. Não devolva o animal à companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado. Manter todos os animais em condições ambientalmente controladas (ciclos normais de claro/escuro de 12 h, 20-24 °C e 40-70% de humidade relativa) com comida e água ad libitum. Certifique-se de seguir os animais de perto, monitorando seu peso corporal, comida, ingestão de água e sua atividade e comportamento normal. Use uma dose letal de pentobarbital sódico para sacrificar os animais (160 mg / kg) se for observado um declínio de 20% no peso corporal ou quando o comportamento normal se deteriorar gravemente (, por exemplo, , falta de higiene).

Materiais

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Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
GB RAT model
F98 Linha celular de glioblastoma	ATCC	CRL-2397
Fischer F344/Ico crl Rats	Charles River	N/A	http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat
Micropump system	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
Quadro estereotáxico	Kopf	902	Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic frame
Diamond drill	Velleman	VTHD02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
Bone wax	Aesculap	1029754	https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
Seringa de insulina Microfine	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
InfraPhil IR lamp	Philips	HP3616/01
Ethilon	Ethicon	662G/662H	FS-2, 4-0, 3/8, 19 mm