Administração de medicamentos intranasais em camundongos via pipeta e canulação reversa para administração de medicamentos nariz-cérebro

Resumo

Fonte: Kanazawa, T., et al. Novos métodos para administração intranasal sob anestesia inalatória para avaliar a administração de medicamentos nariz-cérebro. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra a administração intranasal de medicamentos radiomarcados em um camundongo anestesiado para obter a entrega de medicamentos nariz ao cérebro. Ele explica como as drogas atravessam o epitélio nasal e viajam por vias neuronais para chegar ao cérebro, bem como como o movimento ciliar influencia a retenção e a depuração da droga. Além disso, o vídeo descreve um método alternativo de canulação reversa, que envolve a inserção de uma cânula através do esôfago para administrar medicamentos contra o movimento ciliar, aumentando a retenção e melhorando a eficiência do transporte.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária do JoVE.

1. Animais usados para administração intranasal sob anestesia inalatória

1. Alojar os camundongos experimentais em gaiolas de aço inoxidável sob um ciclo claro/escuro de 12 horas (luz das 8:00 às 20:00), com temperatura controlada mantida em 23 ± 1°C, umidade de 50% ± 10% e acesso ad libitum a comida e água.
2. Antes da experimentação, anestesiar os camundongos por inalação de isoflurano a 2%, após o início a uma concentração de 4%. Confirme o nível necessário de anestesia verificando o desaparecimento do endireitamento da superfície.

2. Preparação da solução de administração

1. Prepare uma solução de administração de [¹⁴C]-inulina (50 μM, 0,5 μCi/ml por ratinho) diluindo em solução salina tamponada com fosfato e conserve a 4 °C até à utilização.

3. Administração intranasal para camundongos

1. Método de micropipeta usando uma máscara inalatória temporariamente aberta (Figura 1)
   1. Fixe os camundongos em decúbito dorsal em um quadro de cortiça prendendo seus membros sob anestesia inalatória com isoflurano a 2% (Figura 1A).
   2. Administre um volume total de solução de administração de 25 μL a cada camundongo em intervalos de 30 segundos, por meio de doses de 1 a 2 μL administradas alternadamente nas narinas esquerda e direita, enquanto os camundongos são fixados sob anestesia inalatória (Figura 1B e C).
   3. Nota: O gás anestésico residual é eliminado por meios ativos (capela de exaustão, gabinete de biossegurança com dutos rígidos, vácuo, etc.) quando a máscara é aberta e por meios passivos (recipiente de gás anestésico residual) quando fechado.
2. Método de canulação reversa do lado das vias aéreas através do esôfago (Figura 2)
   1. Fixe os camundongos em decúbito dorsal em um quadro de cortiça prendendo seus membros sob anestesia inalatória com isoflurano a 2%.
   2. O cabelo do pescoço é raspado e preparado por meio da aplicação de betadina ou clorexidina, seguida de um enxágue com álcool.
   3. Exponha a traqueia e o esôfago expandindo a pele abaixo da garganta com uma pinça após fazer uma pequena incisão (1,5 cm) com uma tesoura.
   4. Faça uma incisão (1 mm) na traqueia usando uma tesoura.
   5. Insira uma cânula (diâmetro interno: 0,58 mm, diâmetro externo: 0,965 mm) com um comprimento de 1,2 cm e prenda a extremidade oposta da cânula ao interior da máscara de inalação.
   6. Faça uma incisão (1 mm) no esôfago com tesoura, insira uma cânula (diâmetro interno: 0,28 mm, diâmetro externo: 0,61 mm) com um comprimento de 1,4 cm em direção à parte posterior da cavidade nasal e ligue-a (Figura 2A e B). Nota: Os procedimentos 3.2.2 a 3.2.4 foram realizados sob um microscópio estereoscópico com aumento de ×10.
   7. Conecte uma agulha (27G × 1/2) a uma seringa de 1 mL cheia de uma solução de administração e conecte a uma bomba de microseringa programável.
   8. Conecte a agulha acima à cânula que foi inserida no esôfago em 3.2.5 (Figura 2C).
   9. Administre um volume total de 25 μL [¹⁴C] de solução de inulina a uma taxa constante (5 μL / min) ( Figura 2C e 2D ).

Resultados

Figura 1: Administração intranasal usando uma micropipeta em conjunto com uma máscara inalatória que pode ser aberta temporariamente. Fotografias mostrando um camundongo fixo (A) com uma máscara fechada antes da administração, (B) um close-up...

Materiais

< classe de figura='tabela'>< tabela class='ck-table-resized'>< estilo col = 'largura: 25%;'>< estilo col = 'largura: 25%;'>< estilo col = 'largura: 25%;'>Lista de materiais utilizados neste artigo Nome Empresa Número de catálogo Comentários ddY mouseJapão SLC, Inc. Masculino, 4-6 semanas, 20-30 gIsofluranoPfizerv002139 Configuração de isofluranoSHINANO manufacturing CO. LTD.SN-487-OTAir, SN-489-4 Máscara de isofluranoSHINANO manufacturing CO. LTD. Para pequenos roedoresMáscara de isoflurano (tipo opneable) SHINANO manufacturing CO. LTD. Pedidos especiaisCaixa de anestesiaSHINANO manufacturing CO. LTD.SN-487-85-02 Tesouras para experimentos com animais-1NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.B-27H Tesouras para experimentos com animais-2NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.Pinça B-13H-1 FINE SCIENCE TOOLS Inc.11272-30Dumont #7 DumoxelPinças-2NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.A-12-1 Tubo de cânula (PE-50)Becton, Dickinson e Companhia.5069773I.D.: 0,58 mm, O.D.: 0,965 mmTubo de cânula (SP-10)NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.KN-392I.D.: 0,28 mm, O.D.: 0,61 mmMáquina de barbearMARUKAN, LTD.Microscópio estereoscópico DC-381 Olympus CorporationSZ61 Agulha 27G 1/2 in 13 mmTERUMO CORPORATIONNN-2738R Seringa de 1mL TERUMO CORPORATIONSS-01T Bomba de seringaNeuro scienceNE-1000 Micro espátulaShimizu Akira Inc.91-0088 Micropipeta (0,5-10 uL)Eppendorf AGZ368083 Chip de pipetaEppendorf AG0030 000.811 FitaTimeMed Labeling System, Inc.T-534-RPara fixação de mouse[¹⁴C]-InulinaAmerican Radiolabeled Chemicals Inc.ARC0124A0,1 mCi/mLEtOHWako Pure Chemical Industries, Ltd.Telefone: 054-00461