Este vídeo demonstra três tipos de análise morfométrica da retina, que incluem a medição da espessura da camada nuclear interna, a quantificação do número de células ganglionares da retina (RGCs) e medindo os tamanhos dos RGCs. A técnica pode oferecer uma plataforma simples, mas científica para análises morfométricas.
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Artigo de método
Análises morfométricas de secções da retina
Neste artigo
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Resumo
Resumo
Análises morfométricas de secções da retina têm sido utilizados na análise doenças da retina. Para exemplos, as células neuronais foram significativamente perdido na camada de células ganglionares da retina (RGCL) em modelos de ratos com N-metil-D-aspartato (NMDA)-induzida excitotoxicidade 1, lesão de isquemia-reperfusão da retina e glaucoma 2 3. Redução do INL e interior camada plexiforme (IPL) espessuras foram invertidos com o tratamento com citicolina em olhos de ratos submetidos a excitotoxicidade do glutamato mediada pelo ácido caínico 4. Alteração da densidade de RGC e tamanhos do soma foram observadas com tratamentos medicamentosos diferentes em olhos com pressão intra-ocular elevada 3,5,6. Portanto, ter métodos objetivos de analisar as morphometries na retina podem ser de grande importância na avaliação de patologias da retina e da eficácia de estratégias terapêuticas.
A estrutura da retina é multi-camadas e vários tipos diferentes de neurônios exir na retina. Os parâmetros morfométricos do retina tais como o número de células, o tamanho da célula e da espessura das camadas de diferentes são mais complexas do que o sistema de cultura celular. Logo no início, estes parâmetros podem ser detectadas usando software de imagem de outro comercial. Os valores são normalmente de valor relativo, e mudando para o valor exacto pode necessitar de cálculo mais preciso. Além disso, o traçado do tamanho da célula e morfologia pode não ser preciso e suficientemente sensível para a análise estatística, especialmente no modelo de glaucoma crónico. As medições utilizados neste protocolo fornecido um modo mais preciso e rápido. E o comprimento absoluto da linha e tamanho da célula pode ser directa e fácil de ser copiado para outros arquivos. Por exemplo, descrevemos a história da margem de núcleos mais interior e exterior, no INL e formou uma linha, em seguida, usando o software para desenhar um ângulo de 90 graus para medir a espessura. Embora sem a ajuda do software, a linha oblíqua e talvez a mudança de espessura da retina podenão ser repetitivo entre observadores individuais. Além disso, o número e densidade de RGCs também pode ser quantificada. Este protocolo com sucesso diminui a variabilidade na quantificação características da retina, aumenta a sensibilidade na detecção de alterações mínimas.
Este vídeo vai demonstrar três tipos de análises morfométricas das secções da retina. Eles incluem a medição da espessura INL, quantificar o número de RGCs e medição dos tamanhos de RGCs em valor absoluto. Estas três análises são realizadas com Stereo Investigator (MBF Bioscience - MicroBrightField, Inc.). A técnica pode oferecer uma plataforma simples, mas científica para análises morfométricas.
Protocolo
1. Ferramentas
Microscópio, Nikon
Investigador Stereo, MBF Bioscience - MicroBrightField, Inc.
2. Preparação
- Antes de trabalhar em qualquer análise morfométrica, cada amostra de retina é seccionado em 4 mícrons de espessura e sofre a coloração H & E.
- A secção de retina é dividida em 4 regiões - região periférica superior, a região central superior, a parte inferior região periférica, e quanto menor região central.
- Depois de definir as regiões, uma imagem de cada região é adquirida em ampliações 10x40 sob o microscópio feixe luminoso da Nikon.
- ....
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Discussão
1. Como obter uma medição de espessura mais precisa?
Você pode ampliar a imagem clicando em "Zoom in" e à esquerda, clique na janela de rastreamento. A fronteira INL pode ser visto claramente. Se a ponta da linha não está na borda externa do INL, podemos ajustar a linha sob o modo de edição. Após escolher a linha em causa, com o botão direito na janela de rastreamento e escolha "Ponto de Inserção na Contour Selecionado". Um ponto pode ser adicionado na fronteira exterior, enquanto o ponto adici.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
O trabalho de pesquisa olho neste laboratório é apoiado pela Fundação Americana de Saúde Adjunto, Azaléia (1972) Fundo de Doações, e do Fundo HKU Projeto Pequeno (20097176185).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Tipo | Companhia | Número de catálogo |
| Investigador Stereo | MBF Software Análise Bioscience | Campo MicroBright | |
| Microscópio | Olympus BX51 | Olympus Corporation | BX51 |
Referências
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)–Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).
- Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. Apopto....
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Reimpressões e permissões
Errata
Formal Correction: Erratum: Morphometric Analyses of Retinal Sections
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.
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