Drosophila melanogaster é um sistema modelo de genética e comportamentalmente tratável que tem sido usada para compreender a base molecular e celular de muitos processos biológicos importantes para mais de um século 1. Drosophila tem sido bem explorado para obter insights sobre a base genética do comportamento da mosca.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Métodos de Ensaio para Drosophila Comportamento
Neste artigo
Resumo
Resumo
Drosophila melanogaster, a mosca da fruta, tem sido utilizada para estudar os mecanismos moleculares de uma ampla gama de doenças humanas, tais como o cancro, doença cardiovascular e várias doenças neurológicas 1. Nós otimizamos simples e robusto ensaios comportamentais para determinar a locomoção das larvas, a capacidade de escalar adulto (ensaio ANEL), e os comportamentos de corte de Drosophila. Estes ensaios comportamentais são amplamente aplicáveis para o estudo do papel dos fatores genéticos e ambientais sobre o comportamento da mosca. Capacidade de rastreamento das larvas pode ser confiavelmente utilizado para determinar alterações em início de carreira nas habilidades de rastreamento de larvas de Drosophila e também para examinar efeito de drogas ou de genes de doenças humanas (em moscas transgénicas) em sua locomoção. O ensaio de rastreamento larval torna-se mais aplicável se a expressão ou a supressão de um gene provoca letalidade nas fases de pupa ou adulto, como estas moscas não chegam à idade adulta, onde de outra forma poderia ser avaliado. Esta base umssay também pode ser utilizado em conjunto com luz brilhante ou stress para examinar respostas comportamentais adicionais em larvas de Drosophila. Comportamento de corte tem sido amplamente utilizada para investigar base genética do comportamento sexual, e também pode ser usado para examinar a actividade e coordenação, bem como a aprendizagem ea memória. Drosophila comportamento de corte envolve a troca de vários estímulos sensoriais incluindo visual, auditivo, e os sinais de quimio entre homens e mulheres que levam a uma série complexa de condutas motoras bem caracterizadas, culminando na cópula bem-sucedida. Ensaios adultos tradicionais de escalada (geotaxis negativos) são de trabalho, tedioso intensivo e demorado, com variação significativa entre os diferentes estudos 2-4. O rápido iterativo geotaxis negativos (ANEL) ensaio 5 tem muitas vantagens sobre os protocolos mais amplamente empregadas, oferecendo uma abordagem de transferência reproduzível, sensível e de alta para quantificar locomotor adulto e negativos geotaxis behaviors. No ensaio de RING, vários genótipos ou tratamentos de drogas podem ser testados simultaneamente utilizando grande número de animais, com a abordagem de alto rendimento tornando-o mais favorável para as experiências de rastreio.
Protocolo
A. Ensaio Crawling larval
1. Coleta de larvas
- Configure uma garrafa de 8 onças de moscas machos (10-15 + de 10-15 fêmeas).
- Deixe moscas põem ovos para 24 horas, em seguida, garrafa transparente de moscas. (Transfira os adultos em um novo frasco e repetir se necessário).
- Incubar garrafa durante 3-4 dias, ou até larvas de terceiro estádio são visíveis.
- Adicionar 50 - 100 ml de sacarose a 20% para a garrafa com larvas e deixar assentar durante 20 minutos. As larvas irá flutuar para o topo.
- Coletar larvas utilizando uma pipeta de 25 ml sorológico com a ponta cortada, e coloque em uma cesta de ma....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Comportamento Drosophila é estreitamente regulada por fatores genéticos e ambientais. Nós, e outros, já utilizado nos ensaios aqui descritos para coletar dados para analisar genes relacionados a comportamentos e voar para humanos doenças neurodegenerativas modelados em Drosophila 5-19. Para o ensaio de rastreamento, seleção criteriosa de 3 º ínstar é um passo crítico. Se o tratamento com um medicamento, levará 10-15 minutos (ou mais dependendo do tipo e da natureza da droga) para .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Não temos nada a divulgar.
Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer a Astha Maltare para gerar os dados rastejantes larvas. Gostaríamos de agradecer ao Dr. Nicholas Lanson Jr. para dar seus comentários sobre o manuscrito. Este trabalho foi financiado pela Robert Packard Centro de ALS em Johns Hopkins (a UBP) e da Associação de Esclerose Lateral Amiotrófica (UBP) e R01MH083689 do National Institutes of Mental Health (CDN).
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | |
| Sacarose | Fisher Scientific | S5-500 | |
| Agarose | Invitrogen | 16500-500 | |
| 6 oz garrafa de Drosophila | Genesee Científico | 32-130 | |
| Paint Brush (# 1) | Ted Pella, Inc. | 11859 | |
| Fly componentes dos alimentos | |||
| Farinha de milho | Fisher Scientific | NC9109741 | |
| Agar | Genesee Científico | 66-104 | |
| Melaço | Fisher Scientific | NC9349176 | |
| Ácido propiônico | Acros | 14930-0010 | |
| Tegosept | Ápice | 20-258 | |
| Etanol | PescadorCientífico | BP2818-4 | |
| Levedura | Genesee Científico | 62-107 |
Referências
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).
- Feany, M. B., Bender, W. W. A Drosophila model of Parkinson's disease. Nature Mar.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
