Síntese combinatória de alta capacidade e liberação de proteínas a partir de polímero de Cinema e Bibliotecas Nanopartículas

Resumo

O método descreve a síntese combinatória de película de polianidrido biodegradáveis ​​e bibliotecas de nanopartículas e de detecção de elevado débito de libertação de proteínas a partir destas bibliotecas.

Resumo

Polianidridos são uma classe de biomateriais com excelente biocompatibilidade e capacidade de entrega de drogas. Embora tenham sido estudados extensivamente com convencional de um exemplo de-a-um-tempo técnicas de síntese, uma abordagem mais recente de alto rendimento tem sido desenvolvido permitindo a síntese e teste de grandes bibliotecas de polianidridos ^1. Isto irá facilitar a optimização mais eficiente e processo de concepção desses biomateriais para aplicações de entrega de drogas e vacinas. O método, neste trabalho descreve a síntese combinatória de película de polianidrido biodegradáveis ​​e bibliotecas de nanopartículas e de detecção de elevado débito de libertação de proteínas a partir destas bibliotecas. Neste método roboticamente operado (Figura 1), os actuadores lineares e bombas de seringa são controlados por LabVIEW, que permite que um protocolo de mãos-livres automatizado, eliminando o erro do utilizador. Além disso, este método permite a fabricação rápida de bibliotecas de micro-escala de polímero, vermelhoucing o tamanho do lote, enquanto que resulta na criação de sistemas de multivariante polímero. Esta abordagem combinatória para a síntese do polímero facilita a síntese de até 15 diferentes polímeros em uma quantidade equivalente de tempo que seria necessário para sintetizar um polímero convencional. Além disso, a biblioteca combinatória de polímero pode ser fabricada em geometrias em branco ou proteína-carregado incluindo filmes ou nanopartículas mediante dissolução da biblioteca de polímero em um solvente e precipitação num não-solvente (por nanopartículas), ou por secagem sob vácuo (para filmes). Durante o carregamento de uma proteína conjugados com fluorocromos para as bibliotecas de polímeros, a cinética de libertação de proteína podem ser avaliadas em alto rendimento, utilizando um método de detecção de fluorescência de base (Figuras 2 e 3), conforme descrito anteriormente ^1. Esta plataforma combinatória foi validado com métodos convencionais de ² e a película de polianidrido e bibliotecas de nanopartículas foram caracterizadas com in vitro de toxicidade celular, citocinas, produção superfície marcador de expressão, adesão, proliferação e diferenciação, e na biodistribuição in vivo e mucoadesão ^1-11. O método desenvolvido aqui combinatória permite alto rendimento de síntese de polímeros e fabrico de proteína-carregado de nanopartículas e bibliotecas de película, a qual pode, por sua vez, ser rastreadas in vitro e in vivo para a optimização do desempenho do biomaterial.

Protocolo

1. Combinatória de Polímeros Síntese Library (Variando em Polymer Química) - veja a Figura 1 para a configuração Robotic

1. Dissolver cada monómero na apropriada (concentração = 25 mg / ml) com solvente e carregar cada para uma seringa de 10 cc de gás apertado.
2. Anexar os solventes tubos capilares de bloqueio lure resistentes ao final de cada seringa.
3. Coloque as seringas nas bombas de seringa (New Era bombas de seringa Programáveis) e bloquear a posição.
4. Definir os actuadores lineares (Zaber) para a posição de partida.
5. Usando pinças do suporte do anel, a posição final de ambos os tubos capilares para den....

Discussão

O conhecimento das condições de síntese necessários e as temperaturas de transição vítrea (T _g s) dos polímeros a ser sintetizados são essenciais para o fabrico de biblioteca. Se o T _g s estão abaixo da temperatura ambiente, o passo de fabrico de nanopartículas podem ter de ser realizado num ambiente com temperatura controlada abaixo da _Tg dos polímeros. Além disso, o cuidado deve ser tomado para assegurar que todo o equipamento que entra em contato com altas temperaturas e os solventes .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Nome	Companhia	Número de catálogo
Estágio motorizado XYZ: 3x T-LSM050A, 50 mm de curso por eixo	Zaber Technologies	T-XYZ-LSM050A-KT04
NE-1000 bomba de seringa única	Sistemas com bombas de Época	NE-1000
Pyrex * Vista * Rimless tubos de cultura de vidro reutilizáveis	Corning	07-250-125
Cubetas de vidro	Estratégias científicos	G102
LabVIEW	National Instruments	776671-35
Seringas SGE gás apertado, Luer Loc	Sigma Aldrich	509507
U96 Deepwell Plates 1,3 ml e 2,0 ml	Thermo Scientific: Nunc	278743
Bem esteiras cap	Thermo Scientific: Nunc	276000
Tufão 9400	GE Healthcare	63-0055-79
Whatman Grade 50 Círculos 90 milímetros	Whatman	1450-090