Na patogénese da metástase óssea, a angiogénese é um processo crucial e, portanto, representa um alvo para imagiologia e terapia. Aqui, apresentamos um modelo do rato de site-specific metástases ósseas de câncer de mama e descrever as estratégias para não-invasiva angiogênese imagem In vivo Usando ressonância magnética, tomografia computadorizada volumétrica e ultra-som.
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Artigo de método
Multi-modal de imagem de angiogênese em um modelo de rato nu de Câncer de mama utilizando a ressonância magnética, tomografia computadorizada volumétrica e ultra-som
Neste artigo
Resumo
Resumo
A angiogênese é uma característica essencial do crescimento do câncer e formação de metástases. Em metástase óssea, factores angiogénicos são cruciais para a proliferação de células tumorais na cavidade da medula óssea, bem como para a interacção do tumor e osso células, resultando em destruição óssea local. Nosso objetivo foi desenvolver um modelo experimental de metástase óssea que permite avaliação in vivo da angiogênese nas lesões ósseas, utilizando técnicas não-invasivas de imagem.
Para este propósito, que injectado 10 5 MDA-MB-231 células cancerosas de mama humano na artéria epigástrica superficial, o que impede o crescimento de metástases em outras áreas do corpo do que a perna respectiva traseira 1. Após 25-30 dias após a inoculação de células de tumor, metástases ósseas específicas do local desenvolver, restrita ao fêmur distal, tíbia proximal e fíbula proximal 1. Aspectos morfológicos e funcionais da angiogênese pode ser investigada longitudinalmente no osso metaestase usando ressonância magnética (MRI), tomografia volumétrica computadorizada (VCT) e ultra-som (EUA).
RM exibe informações morfológica da parte do tecido mole de metástases ósseas que é inicialmente confinados à cavidade da medula óssea e, subsequentemente, excede o osso cortical, enquanto a progredir. Usando dinâmica de contraste MRI (DCE-MRI) funcional dados, incluindo o volume de sangue regional, perfusão e permeabilidade dos vasos podem ser obtidos e quantificados 2-4. Destruição óssea é capturado em imagens de alta resolução usando VCT morfológica. Em complemento a resultados de MRI, lesões osteolíticas pode ser localizado adjacente a sítios de crescimento do tumor intramedular. Após a aplicação de contraste, VCT angiografia revela a arquitetura macrovaso em metástases ósseas em alta resolução, e DCE-VCT permite discernimento na microcirculação destes 5,6 lesões. Dos EUA é aplicável para avaliar as características morfológicas e funcionais a partir de lesões do esqueleto, devido àosteólise local de osso cortical. Usando modo-B e técnicas de Doppler, a estrutura ea perfusão das metástases do tecido mole pode ser avaliada, respectivamente. DCE-US permite imagens em tempo real da vascularização metástases ósseas após a injeção de microbolhas 7.
Em conclusão, em um modelo de site-specific osso câncer de mama metástases técnicas multi-modais de imagem, incluindo ressonância magnética, VCT e informações complementares oferta dos EUA sobre a morfologia e parâmetros funcionais da angiogênese dessas lesões esqueléticas.
Protocolo
1. Cultura de Células
- Cultura MDA-MB-231 células cancerosas de mama humanos (American Type Culture Collection) em meio RPMI-1640 (Invitrogen, Alemanha) suplementado com FCS 10% (Sigma, Alemanha). Manter todas as culturas em condições padrão (37 ° C, atmosfera humidificada, 5% de CO 2) e as células de passagem 2-3 vezes por semana para mantê-las em crescimento logarítmico. Para o modelo animal descrito abaixo, não há necessidade de utilização de osso sub-linhas específicas de MDA-MB-231 células como a taxa de absorção do tumor é superior a 90% 1.
- Colheita sub-confluentes de células tumorais após utilizando EDTA 2 mM em PBS-(s....
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Discussão
O método de indução de osso experimental metástases aqui apresentados, em combinação com os procedimentos de imagem permitir o seguimento lesões osteolíticas em ratos nus longitudinalmente. Em nosso modelo, MDA-MB-231 células humanas de câncer de mama são injetadas no mar, que é uma anastomose entre a artéria ilíaca, através do tronco pudendo ea artéria femoral. Consequentemente, o fluxo de sangue para a região fornecido da articulação do joelho é mantida após a ligadura da SEA. As vantagens deste modelo, em comparação .......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelo Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB TR-23 e SFB-TR 79, TB e DK). Os autores gostariam de agradecer Bangert Renate, Karin Leotta e Lisa Seyler para assistência técnica excelente.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | |
| MDA-MB-231 células cancerosas de mama humano | American Type Culture Collection (ATCC) | HTB-26 | |
| RPMI-1640 | Invitrogen | 61870 | |
| FCS | Invitrogen | 10270 | |
| Tripsina-EDTA | Invitrogen | 25300 | |
| Carprofeno Rimadyl | Pfizer | PZN 110208 | |
| Magnevist | Bayer-Schering | PZN 6961516 | |
| Imeron 400 MCT | Bracco | PZN 228654 | |
| SonoVue | Bracco | PZN 1567358 | |
| Papaverin | Alfa Aesar | L 04152 | |
| Isofluran | Baxter | HDG 9623 | |
| Symphony (ressonância magnética) | Siemens | ||
| Volume CT (tomografia computadorizada volumétrica) | Siemens | ||
| Acuson Sequioa 512 (ultra-som) | Siemens Acuson- |
Referências
- Bäuerle, T. Characterization of a rat model with site-specific bone metastasis induced by MDA-MB-231 breast cancer cells and its application to the effects of an antibody against bone sialoprotein. Int. J. Cancer. 115, 177-186 (2005).
- Merz, M., Komljenovic, D., Zwick, S., Semmler, W., Bäuerle, T.
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Reimpressões e permissões
