Estabelecer um modelo de tumor de bexiga ortotópico para avaliar os efeitos antitumorais de sarna intravesical entregue e acompanhamento do crescimento tumoral por ultra-som e de imagem de bioluminescência.
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Artigo de método
Um modelo de tumor de bexiga ortotópico e Avaliação de Tratamento de sarna intravesical
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Apresentamos um novo método para o tratamento de cancro da bexiga com intravesical entregue pequena activador RNA (sarna) em um xenoenxerto modelo de rato ortotópico tumor da bexiga. O modelo do rato é estabelecido por cateterismo uretral sob anestesia geral inalatória. Queimadura química é então introduzido para a mucosa da bexiga usando solução de nitrato de prata intravesical para romper a camada de glicosaminoglicano bexiga e permite que as células para anexar. Após várias lavagens com água estéril, cancro da bexiga humana KU-7-luc2-GFP células são instilado através do cateter no interior da bexiga para habitar durante 2 horas. Subsequente crescimento de tumores de bexiga é confirmada e monitorado por ultra-som na bexiga vivo e de imagem de bioluminescência. Os tumores são então tratados com intravesical sarna formulados em nanopartículas de lípidos (LNPs). O crescimento do tumor é monitorizado com ultra-sons e bioluminescência. Todos os passos do presente processo são demonstradas no vídeo que o acompanha.
Protocolo
Procedimentos que envolvem seres animais foram aprovados pelo Institutional Animal Care e do Comitê de Uso (IACUC) da Universidade da Califórnia, em San Francisco.
1. Preparação de células
- A bexiga humana linha de células de cancro KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) é crescido em meio RPMI-1640 suplementado com 10% de soro fetal de bovino e 50 gentamicina ug / ml.
- As culturas são mantidas a 37 ° C, 5% de CO 2 com os meios de muda a cada dois a três dias.
- As células foram colhidas por digestão com tripsina e contadas utilizando um hemocitómetro. Uma única suspensão celular de 2 x ....
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Discussão
Apresenta um protocolo para o estabelecimento de um modelo ortotópico xenoenxerto rato tumor da bexiga, seguido de tratamento intravesical dos tumores com LNP sarna formulado que tem como alvo o promotor de p21 CIP1/WAF1 (p21) para a activação transcricional. 2, 3 Os tumores resultantes podem ser confirmada e monitorados com exames de imagem de bioluminescência e ultra-som da bexiga. Modelos ortotópicos pode ser superior à intraperitoneal, subcutânea ou intravenosa os modelos, fornecendo um meio de.......
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Divulgações
LCL é um inventor chamado em pedidos de patentes pendentes relacionadas com a sarna que foram arquivados pela Universidade da Califórnia em San Francisco e licenciada para Alnylam Pharmaceuticals.
Agradecimentos
Esta pesquisa é financiada pelo Henry AACR Bexiga Shepard Cancer Research Grant (09-60-30-LI).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome do reagente | Companhia | Número de catálogo | Comentários (opcional) |
| KU-7-luc-GFP células | Caliper | 128091 | |
| tímicas ratinhos nus (nu / nu) | Simonsen Laboratories | 6-7 semanas de idade | Sim: (NCR) nu / nu fisol |
| Unidade de ultra-som | Visualsonics | Vevo 770 | RMV-704 sonda |
| Unidade de bioluminescência | Caliper | IVIS Spectrum | |
| Exel cateter safelet | Pescador | 14-841-21 | 24G x ¾ " |
| O nitrato de prata | Sigma | S8157 | |
| Hamilton seringa | Hamilton company | 80301 | |
| LNP-sarna | Alnylam Pharmaceuticals |
Tabela 1. Reagentes específicos e equipamentos.
Referências
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United St....
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Reimpressões e permissões
