Os modelos de mouse para Arteriosclerose Graft

Resumo

Descrevemos os protocolos para nossos arteriosclerois enxerto do mouse (GA) modelos que envolvem a interposição de um segmento de vaso do mouse em um receptor da mesma linhagem consanguínea. Por recruzá alterações genéticas adicionais no recipiente dador, o modelo pode determinar o efeito de genes específicos em GA.

Resumo

Arteriosclerois enxerto (GA), também chamado de doença vascular do enxerto, é uma lesão patológica que se desenvolve ao longo de meses ou anos em órgãos transplantados caracterizadas por difusa, estenose circunferencial de toda a árvore vascular do enxerto. O componente mais crítico do GA patogênese é a proliferação de células musculares lisas, como dentro da íntima. Quando um segmento da artéria coronária humana é interposta na aorta infra-renal de ratos imunodeficientes, o INTIMAS poderia ser expandir em resposta a células T humanas adoptivamente transferidos para o dador alogénico artéria ou humana exógena do IFN-γ na ausência de células T humanas. A interposição de uma aorta do rato a partir de uma estirpe para outra estirpe de ratinho receptor é limitado como um modelo para a rejeição crónica em seres humanos, porque a resposta de rejeição mediada por células aguda neste modelo de ratinho elimina completamente todas as células vasculares dos doadores derivados do enxerto dentro de duas a três semanas. Recentemente, desenvolveu dois novos mOuse modelos para contornar esses problemas. O primeiro modelo envolve a interposição de um segmento de vaso a partir de um rato macho em uma fêmea receptora da mesma estirpe consanguínea (C57BL/6J). Rejeição de enxerto, neste caso, é dirigido apenas contra os antigénios de histocompatibilidade menor codificadas pelo cromossoma Y (presente no sexo masculino, mas não a do sexo feminino) e a resposta de rejeição que se segue é suficientemente indolentes para preservar as células musculares lisas derivadas de doadores durante várias semanas. O segundo modelo envolve a interposição de um segmento da artéria de um tipo selvagem C57BL/6J rato doador em um rato hospedeiro da mesma estirpe e sexo que falta o receptor para o IFN-γ seguido por administração de ratinho de IFN-γ (entregue via infecção do ratinho fígado, com um vector adenoviral. Não existe rejeição neste caso como dador e ratinhos receptores são da mesma estirpe e sexo, mas as células do músculo liso dos doadores proliferar em resposta à citoquina, enquanto células hospedeiras derivadas de, por falta de receptoresessa citocina, não respondem. Por recruzá alterações genéticas adicionais no dador embarcação, os dois modelos podem ser utilizados para avaliar o efeito de genes específicos em progressão GA. Aqui, descrevemos os protocolos detalhados para os nossos modelos GA rato.

Introdução

Arteriosclerois prótese (GA), também chamadas de doença vascular do enxerto, é uma lesão patológica, que se desenvolve ao longo de meses ou anos em órgãos transplantados caracterizadas por difuso, estenose circunferencial da árvore vascular do enxerto inteiro ^7. Os estágios iniciais pode causar obstruções excêntricas e focal, que são mais evidente nas artérias, assim, assemelha-se mais estreitamente estenoses visto na aterosclerose convencional. A perda luminal dos vasos enxertados resultados de expansão da íntima devido à infiltração de células T do hospedeiro e os macrófagos e, especialmente, a uma acumulação de matriz extracelular e de músculo liso, tal....

Protocolo

Rato do enxerto e modelo de transplante de enxerto singênico

Todos os estudos com animais foram aprovados pelo Institutional Animal Care e comitês de uso, da Universidade de Yale. Para o modelo do enxerto, segmentos da aorta torácica do homem, 4-5 semanas de idade WT (C57BL/6J) ou IFN-γR-KO foram interpostas na aorta abdominal do receptor do sexo feminino, 8-12 semanas de idade WT com um fim-de -end técnica de anastomose microcirúrgica (ver ao lado para mais detalhes). Para o modelo de enxerto singênico, segmentos da aorta torácica de homens, 4-5 semanas camundongos WT idade foram interpostas na aorta abdominal de macho, 8-12 semanas de idad....

Resultados

Arteriosclerose modelo de rato de aloenxerto (GA): Neste modelo, uma aorta dador é transplantado para macho fêmea receptora, para que o hospedeiro de célula T induz respostas mediadas pelo aloimunes alorreativas contra um antigénio Y menor (antigénio de histocompatibilidade menor do HY-específica do sexo masculino), expresso em o enxerto ^12, e por sua vez, produzido por células T IFN-γ unidades proliferação de VSMC ²⁰ como observado em outros modelos de transplante de aloenxerto

Discussão

Os protocolos descritos estão focados em modelos de ratos GA. Os procedimentos podem ser aplicados a outros modelos de transplante de enxerto. Estes incluem os modelos de xenoenxerto humanizada (isto é, segmentos de artérias coronárias humanas interposta em aortas de infra-renal de ratinhos imunodeficientes), eo modelo de rato GA rejeição aguda (isto é, uma aorta do rato a partir de uma estirpe genética em outro recipiente estirpe genética). Nossos modelos de mouse descritos são mais para fechar lesões.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
C57BL/6J (H-2b)	Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME)	000664	Doador (5 semanas) Receptor (8-12 semanas)
Injeção de Cloridrato de Cetamina	Hospira Inc.	NDC 0409-2053	Solução de armazenamento (50 mg / ml) < br / > Solução de trabalho (5 mg / ml)
Solução estéril de xilazina	Lloyd Inc.	NADA# 139-236	Solução de Armazenamento (100 mg / ml) < br / > Solução de Trabalho (1 mg / ml)
Cetoprofeno	Fort Dodge Animal Health	NDC 0856-4396-01	Solução de Armazenamento (100 mg / ml) < br / > Solução de Trabalho - oral < br / > (0,027 mg / ml)
Heparina Sagente	Sódio Pharmaceticals	NDC 25021-400	Solução de Armazenamento (1000 U / ml) < br / > Solução de Trabalho (100 U / ml)
Solução salina (Estéril 0,9% Cloreto de sódio)	CareFusion	AL4109
Injeção de cloreto de sódio a 0,9%	Hospira Inc.	NDC 0409-4888-10	Para preparar o anestésico
Pomada Oftálmica Petrolato	Dechra Produtos Veterinários	NDC 17033-211-38
Almofadas de Preparação de Iodo	Tríade Descartáveis, Inc.	NDC 50730-3201-1
Almofadas de preparação de álcool	McKesson Corp.	NDC 68599-5805-1
Microscópio	Leica	MZ95
Micro Tesoura	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5693
Tesoura de mola	FST	15009-08	Para transeccionar a aorta do doador ou receptor
Tesoura extra estreita	FST	14088-10
Porta-agulha / fórceps	MICRINS	MI1542	Para segurar a agulha
Pinça fina	FST	11254-20
Pinça	FST	11251-35
Fórceps padrão	padrão FST	11000-12
Fórceps	FST	13011-12
Espéculo ocular LANCASTER	Zepf Medical Instruments	42-1209-07
Micro Vascular Clip	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-6472
Micro Clip Aplicando Fórceps Com Trava	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5440
Sutura de Monofilamento de Poliamida Preta	AROSurgical Instruments Corporation	Cat #T4A10Q07	10-0 sutura, Agulha = 70 mícrons
Monofilamento Preto Nylon Sutura	Syneture (Covidien)	SN-1956	6-0 sutura
Não Tecida Songes	McKesson Corp.	Nº 94442000
Seringa de 1 ml	BD	REF 309659
Seringa de 3 ml	BD	REF 309657
Seringa de 10 ml	BD	REF 309604
18G 1 1/2, Agulha Hipodérmica	BD	REF 305196
25G 7/8, Agulha Hipodérmica	BD	REF 305124
27G 1/2, Agulha Hipodérmica	BD	REF 305109
30G 1/2, Agulha Hipodérmica	BD	REF 305106
Almofada Hearting Sunbeam		Z-1228-001
Aparador	Wahl	9854-500