5/6th Nephrectomy em combinação com uma dieta alta de sal e Óxido Nítrico Sintase inibição para induzir o Doença Renal Crônica no Rato Lewis

Resumo

Um método de duas fases para estabelecer a doença renal crónica (IRC) em ratos Lewis por remoção cirúrgica da massa renal 5/6th é descrito. Combinação do procedimento cirúrgico, NOS-inibição e uma dieta rica em sal leva a um modelo semelhante CKD humano, permitindo estudo dos mecanismos causais e desenvolvimento de intervenções terapêuticas.

Resumo

A doença renal crônica (DRC) é um problema global. Retardar a progressão da doença renal crônica é uma das principais prioridades de saúde. Desde DRC é caracterizada por desarranjos complexos de homeostase, os modelos animais integrativos são necessárias para estudar o desenvolvimento e progressão de DRC. Para estudar o desenvolvimento de intervenções terapêuticas com DRC e romance em CKD, usamos o modelo de ablação nefrectomia 5/6th, um modelo experimental bem conhecido de doença renal progressiva, assemelhando-se vários aspectos da CKD humano. A redução bruta da massa renal provoca glomerular progressiva e lesão túbulo-intersticial, perda de néfrons remanescentes e desenvolvimento de hipertensão arterial sistêmica e glomerular. Também está associada com a perda progressiva intra capilar, inflamação e glomeruloesclerose. Fatores de risco para DRC invariavelmente impacto sobre a função endotelial. Para simular isso, nós combinamos remoção de 5/6th da massa renal com o óxido nítrico (NO) exaustão e uma dieta rica em sal. Após a chegada e aclimatação, os animais receber um inibidor da sintase de NO (NG-nitro-L-arginina) (L-NNA), suplementado com a água de beber (20 mg / L) durante um período de 4 semanas, seguido de uninefrectomia no lado direito. Uma semana mais tarde, uma nefrectomia subtotal (SNX) é realizada no lado esquerdo. Após SNX, os animais são deixados a recuperar durante dois dias seguidos por LNNA na água de beber (20 mg / L) por um período adicional de 4 semanas. Uma dieta rica em sal (6%), complementado em terra de comida (veja linha do tempo Figura 1), continua durante todo o experimento. A progressão da insuficiência renal é seguida ao longo do tempo medindo a ureia plasmática, pressão arterial sistólica e proteinúria. Por seis semanas após SNX, insuficiência renal desenvolveu. A função renal é medida usando inulina "padrão ouro" e ácido para-amino hipúrico (PAH), tecnologia de apuramento. Este modelo de DRC é caracterizada por uma redução na taxa de filtração glomerular (TFG) e do fluxo plasmático renal eficaz (FPER), hipertensão (pressão sanguínea sistólica> 150 mm Hg), a proteinúria (> 50 mg/24 hr) E uremia leve (> 10 mM). As características histológicas incluem danos túbulo-intersticial reflectida pela inflamação, atrofia tubular, e fibrose e glomeruloesclerose focal conduzindo a enorme redução dos glomérulos saudáveis ​​na população remanescente (<10%). Follow-up até 12 semanas após SNX mostra a progressão da DRC.

Introdução

Devido ao seu caráter progressivo, resultante final da doença renal em estágio, e morbidade cardiovascular e mortalidade associadas, DRC é um problema crescente de saúde pública ^1. Retardar a progressão da doença renal crônica é, portanto, uma prioridade de saúde. Desde DRC é caracterizada por desarranjos complexos de homeostase, os modelos animais integrativos são necessárias para estudar o desenvolvimento e progressão de DRC. O rim é composto de uma ampla gama de diferentes tipos de células que interagem uns com os outros. Esta complexidade não pode ser mimetizado in vitro.

Para estudar as intervenções terapêuticas e....

Protocolo

Todos os experimentos são executados de acordo com as linhas de orientação éticas animais experimentais da comissão de animal experimental Utrecht. O protocolo é realizada sob a orientação e aprovação dos cuidados com os animais da instituição do autor e da comissão de uso.

DRC é induzida em ratos Lewis consanguíneos machos (Charles River, Sulzfeld, Alemanha) com a idade de 8 semanas. Os ratos são alojados sob condições padrão num ambiente, luz, temperatura e humidade controlada.

1. Preparação da cirurgia

1. Esterilizar instrumentos cirúrgicos:
   • Um tecido estudante forceps 1-2 dentes de 12 cent....

Resultados

Após a nefrectomia subtotal, aproximadamente 1/6th da massa renal total é para a esquerda. Figura 4 mostra o peso da parte removida do rim direito com média e desvio padrão, em duas experiências anteriores. Deve-se ter em mente que, durante a semana depois da UNX, hipertrofia do rim esquerdo ocorre, indicando que o peso que deve ser removido calculado com base no peso do rim direito sempre resulta em menos do que a remoção 5/6th. No entanto, uma vez que não é possível determinar o peso do rim esquerdo d.......

Discussão

A remoção cirúrgica do 5/6th da massa renal em ratos Lewis, combinada com uma dieta rica em sal e inibição temporária NOS leva a um modelo de doença renal crônica que se assemelha CKD humana e permite o estudo dos mecanismos causais e eficácia de intervenções terapêuticas em CKD.

O modelo de nefrectomia 5/6th é um modelo bem conhecido e descrito extensivamente para DRC. No entanto, a simples remoção 5/6th da massa renal não levar à insuficiência renal imediato em todas as cepas de ratos. Usa.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
			Reagente
L-NNA	Sigma-aldrich	N5501
Spongostan dental: almofadas de espuma de gel 1x1x1 cm	Johnson& Johnson	Ms0005
Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36	Ethicon	V303H
Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36	Ethicon	V392H
Buprenorfina (0,3 mg/ml)	Através de farmacêutico local encomendado pela Reckitt Benckiser pharmaceuticals	desconhecido
			Equipamento
Pinça de Tecido para Estudantes - 1x2 Dentes 12 cm	Ferramentas de Ciência Fina (FST)	91121-12
Fórceps Padrão de Estudante	FST	91100-12
Tesoura Mayo	FST	14010-15
2X Pinças Semken	FST	11008-13
Tesoura de Estudante Iris	FST	91460-11
Porta-agulhas Olsen-Hegar	FST	12002-14