Parabiótico junção dos dois organismos conduz ao desenvolvimento de um sistema circulatório compartilhado. Neste protocolo, descrevemos os passos cirúrgicos para formar uma conexão parabiótico entre um rato do tipo selvagem e um rato expressando GFP constitutiva.
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Artigo de método
Parabiose em Ratos: Um protocolo detalhado
Neste artigo
Resumo
Resumo
Parabiose é uma união cirúrgica de dois organismos, permitindo a partilha da circulação sanguínea. Colocar a pele de dois animais promove a formação de microvasos no local da inflamação. Parceiros parabiótico compartilhar seus antígenos circulantes e, portanto, estão livres de reação imune adversa. Descrita pela primeira vez por Paul Bert, em 1864 1, a cirurgia parabiose foi refinado por Bunster e Meyer em 1933 para melhorar a sobrevivência de animais 2. No protocolo de corrente, dois ratinhos são unidas cirurgicamente na sequência de uma alteração da técnica de Bunster e Meyer. Os animais são conectadas através das articulações do cotovelo e joelho seguido por uma ligação da pele permitindo um apoio firme que impede pressão sobre a pele suturada. Relata-se em detalhe a parabiótico união de um GFP onipresente expressar mouse para um tipo selvagem (WT) mouse. Duas semanas após o procedimento, o par é separada e as células positivas para GFP pode ser detectada por meio de análise de citometria de fluxo no sangue circulanteíon do camundongo WT. O quimerismo sanguíneo permite examinar a contribuição das células circulantes de um animal no outro.
Introdução
Parabiose, juntando-se a cirurgia de dois organismos, foi descrita pela primeira vez em 1864 por Paul Bert, como forma de desenvolver um modelo para o estudo de sistemas circulatórios compartilhados e consistiu na junção da pele e paredes musculares de dois ratos 1. Parabiose promove a formação de microvasos no local de inflamação 3 e tem tido várias aplicações em estudos fisiológicos, tais como a comunicação hormonal entre a glândula pituitária e gónadas, bem como o papel da hipertensão renal em 4. Foi ainda utilizado para investigar o recrutamento ea integração de células progenitoras na neovascularização 5, migração de c....
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Protocolo
Todos os estudos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes de cuidados com os animais e uso comitê da UCLA e os Institutos Nacionais de Saúde Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. A duração do procedimento descrito abaixo é cerca de 45-60 minutos do começo ao fim.
1. Preparação de campo cirúrgico
- Realize o procedimento em uma sala de cirurgia animal limpo.
- Equipamento: isoflurano vaporizador, Gaymer T Bomba com almofada de aquecimento.
- Ferramentas estéreis: duas pinças, tesouras curvas finas, porta-agulha.
- Luvas estéreis deve ser usado durante todo o procedimento. ....
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Resultados
O resultado esperado de parabiose de dois organismos é a contribuição igual de sistema circulatório do animal para cada uma circulação de sangue comum (Figura 2). Pode-se facilmente verificar o equilíbrio bem sucedido do sangue dos ratinhos WT positivo e GFP parabiosed por análise de citometria de fluxo. Aqui, o sangue venoso foi obtida a partir das caudas de ambos parabionts às 2 semanas após a cirurgia e foi fraccionado por células sanguíneas periféricas (para excluir eritrócitos). A fracção de célula.......
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Discussão
O método parabiose discutido aqui apresenta dificuldades e resultados técnicos mínimos em baixas taxas de mortalidade. A fixação do joelho e cotovelo é uma melhoria significativa da Bunster e técnica Meyer. No entanto, o procedimento invasivo permanece, assim, a manutenção de condições estéreis durante toda a cirurgia é imperativo. Para prevenir novas infecções do sítio cirúrgico, é importante que os animais parabiosed receber uma combinação de antibióticos e ser monitorizados regularmente. Para assegurar um suporte fir.......
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Divulgações
Os autores não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer a Adriane Mosley e Libuse Jerabek (Stanford) para obter assistência com a técnica cirúrgica.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Isoflurano-Phoenix | Clipper | NDC 57319-559-06 | |
| Posi-Seal Câmara de Indução | Imagem Molecular | AS-01-0530-SM | |
| Sistema de Anestesia Portátil | Produtos de Imagem Molecular | AS-01-0007 | |
| Bomba Gaymer T | Gaymar Industries, Inc | TP650 | |
| Manta de Aquecimento (Almofada de Aquecimento) | Kent Scientific Corp | TP-22G | |
| Pinça Curva | Roboz | RS-5101 | |
| Tesoura | Fine Science Tools (FST) | FST 14063-09 | |
| Porta-agulha | FST | FST 12501-13 | |
| Barbeador elétrico | Oster | Golden A5 |
Referências
- Bert, P. Expériences et considérations sur la greffe animale. Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 Forthcoming.
- Bunster, E., Meyer, R. K. Improved methods of parabiosis. Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).
- Waskow, C.
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Reimpressões e permissões
