In vivo 19 F MRI para Rastreamento celular

Resumo

Nós descrevemos um protocolo geral para no rastreamento de células in vivo utilizando ressonância magnética em um modelo de rato com ex vivo células marcadas. Um protocolo típico para a marcação de células, o processamento de aquisição de imagem e a quantificação é incluído.

Resumo

In vivo ¹⁹ F MRI permite o acompanhamento quantitativo de células sem o uso de radiação ionizante. É uma técnica não-invasiva, que pode ser aplicado aos seres humanos. Aqui, nós descrevemos um protocolo geral para marcação celular, imagem e processamento de imagem. A técnica é aplicável a vários tipos de células e modelos animais, embora aqui nos concentramos em um modelo típico do mouse para rastrear células do sistema imunológico murino. As questões mais importantes para a rotulagem de células são descritos, uma vez que estes são relevantes para todos os modelos. Do mesmo modo, os principais parâmetros de imagem são listados, embora os pormenores irão variar dependendo do sistema de ressonância magnética e a configuração do indivíduo. Finalmente, incluímos um protocolo de processamento de imagem para quantificação. Variações para esta e outras partes do protocolo, são avaliados na seção Discussão. Com base no procedimento detalhado descrito aqui, o usuário terá de adaptar o protocolo para cada tipo específico de célula, etiqueta de pilha, modelo animal, e configuração de imagem. Note-se que o protocolo também pode ser adaptado para uso humano, desde que sejam satisfeitas as restrições clínicos.

Introdução

Em rastreamento celular vivo é essencial para a otimização e monitoramento de terapias celulares ^1. Devido à sua natureza não-invasiva, a imagem oferece excelentes oportunidades para monitorar as células in vivo. Imagem por Ressonância Magnética (MRI) é independente da radiação ionizante e permite uma resolução de imagem superior e contraste intrínseco dos tecidos moles. Rastreamento de células baseado em MRI já foi utilizada clinicamente para seguir as células dendríticas em pacientes com melanoma, ^2. IRM clínica convencional é realizada sobre o núcleo ¹ H, presentes na água celular em tecidos. Também é pos....

Protocolo

Nota: Todos os experimentos e procedimentos que envolvem animais devem ser realizados de acordo com as diretrizes éticas relevantes e em conformidade com a norma cuidados com os animais e as exigências humanas.

1. Rotulagem celular (protocolo padrão com coincubação)

1. Adicionar ¹⁹ F etiqueta ⁸ a DC imaturas a uma concentração de 4 mg/10 ⁶ células (em 2 ml de meio). Agitar suavemente para misturar.
2. Incubar as células com a etiqueta, durante 3 dias antes da maturação e colheita das DCs.
3. Recolha os DCs e remover o excesso de etiqueta por lavagem pelo menos 3x em PBS. Contar as cél....

Resultados

Aqui mostramos os resultados típicos para um protocolo que envolve a transferência de ¹⁹ células marcadas F-homing a um nodo de drenagem linfática. Figura 2 mostra um espectro de RMN ^{de 19F} de 10 ⁶ células marcadas, utilizando uma referência de TFA. A estrutura de imagem foi realizada como descrito no protocolo (Figura 3). Para a imagem in vivo em, utilizou-se uma referência que consiste de um cilindro selado da mesma etiqueta utilizada para as .......

Discussão

O protocolo descrito aqui descreve o procedimento geral para a in vivo ¹⁹ de rastreamento de células F ressonância magnética. Apesar do método de co-incubação descritas, existem vários protocolos diferentes para a marcação das células com um agente de F ^19. No entanto, a co-incubação é mais frequentemente utilizado e pode ser optimizado adicional, por exemplo, por adição de agentes de transfecção ^6. O protocolo de marcação celular real dependerá do tipo de célula. Apena.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
REAGENTS
PBS	Sigma-Aldrich	MFCD00131855
TFA	Sigma-Aldrich	76-05-1
Cetamina (Ketavet)	Pfizer	778-551
Xilazina (Rompun)	Bayer	QN05 cm92
Oftosana	Produlab Pharma	2702	pomada para os olhos
Nome do material
scanner de ressonância magnética	Espectrômetro Bruker Biospec
NMR	Bruker Biospec