Artigo de método

Procedimentos para identificar Infecciosas príons após a passagem através do sistema digestivo de uma espécie de aves

DOI:

10.3791/50853

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6 de novembro de 2013

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1Animal and Plant Health Inspection Service, Wildlife Services, National Wildlife Research Center, USDA

Neste artigo

Resumo

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Catadores têm potencial para translocam infecciosas transmissíveis prions encefalopatia espongiforme em suas fezes para áreas livres da doença. Nós métodos de detalhes usados ​​para determinar se prions de scrapie mouse adaptados permanecer infeccioso após a passagem que o trato digestivo dos corvos-americanos (Corvus brachyrhynchos), o consumidor comum de animais mortos.

Resumo

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Material de príon infeccioso (PrP Res) é provável que a causa da fatal, neurodegenerativa Encefalopatia Espongiforme Transmissível (EET) doenças 1. A transmissão de doenças TSE, tais como a doença debilitante crónica (CWD), presume-se ser de animal para animal de 2,3, bem como a partir de fontes ambientais 4-6. Catadores e carnívoros têm potencial para translocação de material PrP Res através do consumo e excreção de carniça contaminados com CWD. Trabalhos recentes tem documentado passagem de material PrP Res através do sistema digestivo dos corvos-americanos (Corvus brachyrhynchos), um limpador norte-americano comum 7.

Nós descrevemos os procedimentos utilizados para documentar a passagem de material PrP Res através corvos americanos. Crows foram tratadas por gavage com RML-deformação scrapie adaptado do rato e suas fezes foram coletadas 4 post hr gavage. Fezes galinha foram em seguida reunidas e injectadas por via intraperitoneal emC57BL / 6. Ratos foram monitorados diariamente até que eles manifestaram sinais clínicos de rato scrapie e foram, posteriormente, submetidos à eutanásia. Camundongos assintomáticos foram monitoradas durante 365 dias após a inoculação. Análise de Western blot foi realizada para confirmar o estado da doença. Os resultados revelaram que os príons infecciosos permanecer depois de viajar através do sistema digestivo de corvos e estão presentes nas fezes, causando doença em ratos de teste.

Introdução

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As encefalopatias espongiformes transmissíveis (EET) são desordens neurodegenerativas fatais infecciosas que afetam a vida selvagem, os animais domésticos e seres humanos. O agente infeccioso de doenças TSE parece ser isoformas deformadas ou patogênicos (PrP Res) de uma proteína príon. EET animal incluem doença debilitante crônica (CWD) em veados (Odocoileus hemionus), veados de cauda branca (Odocoileus), alces (Cervus elaphus) e alce (Alces alces); scrapie em ovinos e caprinos; encefalopatia espongiforme bovina ( BSE) em gado doméstico; encefalopatia mink transmissível em mink viveiro; encefalopatia espongifo....

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Protocolo

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Nosso protocolo foi adaptado de um nós publicado anteriormente 7. Todos os procedimentos envolvendo animais foram aprovados pelo Comitê do Departamento de Agricultura dos EUA (USDA), de animais e plantas Serviço de Inspeção de Saúde (APHIS), Wildlife Services (WS), Centro Nacional de Pesquisa da Vida Selvagem (NWRC) Institutional Animal Care e Use.

1. Corvo Gavaging

  1. Estimar o tempo de passagem do 'material cerebral pseudo' através do trato digestivo de corvos americanos.
    1. Misture 5 ml de cozidos e ovos mexidos inteiro com corante azul e gavage um corvo com um 2 em agulha gavage (Figura 1).

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Resultados

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Os procedimentos utilizados demonstram que o sistema digestivo do corvos não elimina PrP Res. infecciosidade 4 h após gavagem oral de homogeneizado de cérebro scrapie 7. Todos os vinte corvos que foram tratadas por gavage com material PrP Res posteriormente transmitidos material de PrP Res via fezes de ratos. Ratos doentes foram identificados pela manifestação dos sinais rato-scrapie clínicos e confirmação da doença foi completada por análise de Western blot.

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Discussão

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Nós demonstramos um procedimento para documentar a passagem de material de PrP Res através do sistema digestivo de corvos. Usamos métodos convencionais para determinar se os corvos têm a capacidade de translocação de material PrP Res para áreas geográficas livres da doença. Outros avaliaram a resistência de PrP Res para ruminantes 19-21 e roedores 22,23 fluidos digestivos, sendo que ambos não conseguiram eliminá-lo. A futura aplicação destas técnicas devem ser aplic.......

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Agradecimentos

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Gostaríamos de agradecer a S. Werner para fornecer os corvos utilizados neste estudo e USDA, APHIS, WS, NWRC equipe de cuidados de animais para cuidar dos animais e monitoramento. Mencione ou utilização de um produto não implica o endosso do USDA. O financiamento para este estudo foi fornecido pelo USDA, APHIS, Serviços Veterinários.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Cepa RML Chandler scrapie adaptado para camundongosRocky Mountain Laboratories
RC57BL / 6 camundongosHilltop Lab Animals Corvos
americanoscapturados
Caneta / StrepInvitrogen15140-122
Fosfato tamponado solução salinaInvitrogen70011-044
SonicatorMisonix
Proteinase-K soluçãoRoche3115887001
Tampão de carregamentoInvitrogenNP0007 e 0009
Bis-tris SDS PAGE 12% gelInvitrogenNP0342
Membrana Immobilon PVDFMillipore1SEQ00010
Tween 20Sigma AldrichP2287
Bullet homogeneizador misturadorBraintree ScientificBBX24B
2,3 mm Grânulos de zircônia/sílicaProdutos BioSpec11079125Z
Bar224 anticorpo monoclonal anti-PrPCayman Chemical10009035
SuperblockThermo Scientific37517
substrato quimioluminescenteMilliporeWBKLS0500
G-box sistema de documentação em gelSyngene
selvagens

Referências

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  1. Prusiner, S. B. Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie. Science. 216 (4542), 136-144 (1982).
  2. Miller, M. W., Williams, E. S., et al. Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming. Journal o....

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Material PrPResPassagem pelo Sistema DigestivoCorvos AmericanosColeta de FezesInje o IntraperitonealBioensaio em CamundongosAn lise por Western BlotMonitoramento de Sinais Cl nicosDigest o com Proteinase K

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