DNBS / colite induzida por TNBS oferece um método alternativo e de baixo custo para estudar a fisiopatologia das doenças inflamatórias do intestino. O protocolo discutidos neste documento descreve a aplicação bem-sucedida de DNBS para induzir colite em camundongos e ratos e permite estudar minuciosamente respostas intestinais com hospedeiros.
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Artigo de método
DNBS / TNBS Colite Modelos: elucidando sua Doença Inflamatória Intestinal e Efeitos de gordura na dieta
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Doenças inflamatórias do intestino (DII), incluindo a doença de Crohn e colite ulcerativa, têm sido associados com uma base genética, e, mais recentemente, a resposta imune do hospedeiro agentes microbianos e ambientais. Colite dinitrobenzeno ácido sulfônico (DNBS) induzida pelo permite estudar a patogênese da DII gatilhos ambientais associados, como estresse e dieta, os efeitos de terapias potenciais e os mecanismos subjacentes a inflamação intestinal e da mucosa da lesão. Neste trabalho, investigamos os efeitos dos ácidos n-3 e n-6 ácidos graxos na dieta sobre a resposta inflamatória da mucosa do cólon de colite induzida por DNBS em ratos. Todos os ratos foram alimentados com dietas idênticos com a excepção de diferentes tipos de ácidos gordos [óleo de cártamo (SO), óleo de canola (CO), ou óleo de peixe (FO)] durante três semanas antes da exposição ao intrarectal DNBS. Ratos controle dadas etanol intra-retal continuou a ganhar peso ao longo do estudo de 5 dias, enquanto que, os ratos tratados com DNBS dietas lipídicas alimentados todos lost de peso em ratos e FO CO alimentados demonstrando significativa perda de peso por 48 horas e ratos alimentados SO por 72 horas. O ganho de peso retomada após 72 horas pós DNBS, e por 5 dias após DNBS, o grupo FO teve um peso corporal superior ao SO ou grupos CO. Seções do Colo coletadas 5 dias após DNBS-tratamento mostrou ulceração focal, destruição cripta, a depleção de células caliciformes, e mucosa infiltração de ambas as células inflamatórias agudas e crônicas que diferiam em termos de gravidade entre os grupos de dieta. O grupo SO alimentada mostrou o dano mais grave, seguido pela CO, e FO alimentado grupos que apresentaram o mais suave grau de lesão tecidual. Da mesma forma, a mieloperoxidase colónica (MPO) A actividade, um marcador da actividade de neutrófilos foi significativamente mais elevada nas SO seguidos de ratos alimentados com CO, com FO ratos alimentados com actividade significativamente menor MPO. Estes resultados demonstram o uso de colite induzida por DNBS, conforme descrito neste protocolo, para determinar o impacto da dieta na patogênese da DII.
Introdução
Doença inflamatória do intestino (IBD) é caracterizada por uma inflamação crónica recidivante no tracto gastro-intestinal (GI), resultando em sintomas de diarreia, perda de peso e dor abdominal. A colite ulcerosa (UC) e doença de Crohn (CD) são as duas formas principais de DII, e podem ser distinguidas pela localização da inflamação dentro do tracto GI. Em pacientes UC, a inflamação geralmente envolve o reto e estende-se de forma contígua no cólon por um grau variável afetando apenas a mucosa superficial. Em contraste, o CD pode afectar qualquer parte do tracto GI, embora afecta predominantemente o íleo e ceco. CD freqüentemente se manifesta como uma inflamação trans....
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Protocolo
Procedimentos envolvendo assuntos animais seguir as orientações de cuidados de animais delineadas pelo Animal Care e Use Comitê Institucional (IACUC) da Universidade de British Columbia.
Procedimentos descritos no presente protocolo irá ser descrito, tanto para os ratos e murganhos, enquanto que os resultados representativos, será apresentado a partir de ratos Sprague-Dawley.
1. Preparação de DNBS e administração intra-rectal
- Para a instilação rectal de DNBS em ratos, recém preparar 15-30 mg de DNBS/250 ul de etanol a 50%. Para ratos, preparar 2-6 mg de DNBS/100 mL de etanol 50%. Nota: Otimizar a co....
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Resultados
Desafio de ratos (Sprague-Dawley) ou ratinhos (C57BL / 6) com DNBS normalmente resulta na perda de peso transiente e diarreia, por vezes, com a presença de sangue nas fezes. No entanto, fatores como a genética, dieta e microbiota intestinal pode modificar a susceptibilidade a colite induzida DNBS. Portanto, os animais incluídos nos experimentos deve ser da mesma instituição, seja derivada localmente ou ordenadas a partir de um fornecedor animal. Todos os animais devem ser cuidadosamente monitorizados para o grau de perd.......
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Discussão
O modelo descrito neste DNBS protocolo é um modelo válido, barato e reprodutível que a colite pode ser utilizado para o estudo de vários aspectos da DII. Quando administrado por via retal de ratos ou camundongos, DNBS induz um grau substancial de inflamação e lesão tecidual no cólon, assemelhando-se a doença de Crohn humana em termos de suas várias características histológicas, incluindo infiltração transmural de polimorfonucleares e predominante NF-kB-dependente ativação Th1.
Este modelo te.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por subvenções de funcionamento a KJ de Ciências Naturais e Engenharia do Conselho de Pesquisa do Canadá (NSERC) ea doença de Crohn e Colite Foundation of Canada (CCFC). VM é apoiado por uma bolsa CFRI e uma bolsa de estudo de pós-graduação GB dos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (CIHR). BAV é um Crianças com intestinal e doenças hepáticas Foundation (CRIANÇA) Chair of Pediatric Research IBD ea Cátedra de Pesquisa do Canadá em Gastroenterologia Pediátrica e KJ é um Clínico Cientista Sênior apoiado pelo Criança e da Criança e do Instituto de Pesquisa da Família (CFRI) Programa Clínico Prêmio Cientistas , University of British Columb....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Seringa de 1 ml | BD Biosciences | 309659 | |
| Agulha de 19 G | BD Biosciences | 305187 | |
| Tubo de polietileno PE-50 | BD Biosciences | 427517 | para administração intrarretal em camundongos |
| Tubo de polietileno PE-90 | BD Biosciences | 427519 | para administração intrarretal em ratos |
| DNBS | MP Bio | 150959 | |
| Gel lacrimal | Novartis | 63601662596 | |
| 10% Formalina | Fisher | 5F93-4 | |
| Almofada de aquecimento | Kent Scientific | TPZ-0510 | |
| Etanol | Fisher | A-962.4 | |
| Brometo de hexadeciltrimetil-amônio | Sigma-Aldrich | H5882 | |
| Solução tampão de fosfato de potássio | Sigma-Aldrich | 79628- | |
| dicloridrato de o-dianisidina | Sigma-Aldrich | D3252 | |
| 30% H2O2 | Sigma-Aldrich | 31642 | peróxido de hidrogênio |
| Espectrofotômetro | BioRad | Benchmarker Plus | |
| Microscópio de Luz | Zeiss | Axio Image.Z1 | |
| Programa de software de análise de dados | Software | GraphPad Software GraphPad Prism Versão 4.00 | www.graphpad.com |
Referências
- Perše, M., Cerar, A. Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. Biotechnol, J. . B. iomed , (2012).
- Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression. Gastroenterology. <....
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Reimpressões e permissões
