Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.
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Artigo de método
Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda
Neste artigo
Resumo
Resumo
Infarto agudo do miocárdio ou crônica (MI) são eventos cardiovasculares, resultando em altas taxas de morbidade e mortalidade. Estabelecer os mecanismos patológicos no trabalho durante MI e desenvolvimento de abordagens terapêuticas eficazes requer metodologia para simular reproducibly a incidência clínica e refletir as alterações fisiopatológicas associadas ao MI. Aqui, nós descrevemos um método cirúrgico para induzir MI em modelos de rato que pode ser utilizado para a curto prazo de isquemia-reperfusão (I / R), bem como lesões de ligação permanente. A principal vantagem deste método é o de facilitar a localização da artéria descendente anterior esquerda (LAD) para permitir a ligação exacta desta artéria para induzir isquemia no ventrículo esquerdo do coração do rato. Posicionamento preciso da ligadura sobre o LAD aumenta a reprodutibilidade do tamanho do infarto e, portanto, produz resultados mais confiáveis. Maior precisão na colocação da ligadura vai melhorar as abordagens cirúrgicas padrão para simular MI em camundongos, thus reduzir o número de animais experimentais necessárias para estudos estatisticamente relevantes e melhorar a nossa compreensão dos mecanismos que produzem a disfunção cardíaca após IAM. Este modelo do rato de MI também é útil para o teste pré-clínico de tratamentos que visam dano miocárdico seguinte MI.
Introdução
Os modelos animais de infarto do miocárdio (IM) são importantes na investigação da fisiopatologia complexo de doença isquêmica do coração 1. Isquemia-reperfusão (I / R) lesão é um dos principais contribuintes do dano miocárdico gerado durante MI. A lesão de isquemia inicial produzida por oclusão da circulação coronária pode ser minimizada em pacientes MI pelo uso de angioplastia para restabelecer a perfusão de uma forma atempada. Embora esta intervenção reduziu muito o número de mortes devido a infarto agudo do miocárdio, a restauração do fluxo sanguíneo para a área a presença de isquemia em I / R lesão que leva à morte dos cardiomiócitos. Esta perda de ma....
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Protocolo
Este protocolo animal foi aprovado e está em conformidade com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela Animal Care e Use Comitê Institucional (IACUC) no The Ohio State University. Todas as políticas desenvolvidas pelo IACUC locais estão em conformidade com o Guia de Experimentação Animal desenvolvido pela Office of Laboratory Animal Welfare no National Institutes of Health.
1. Anestesia e entubação endotraqueal
- Autoclave todos os instrumentos e material cirúrgico antes do uso. Usar luvas estéreis de uso único, cirúrgicos em todo o processo. Manter um ambiente estéril durante todo o procedimento. O uso de um campo estéril....
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Resultados
Após 24 horas de reperfusão, a análise do tamanho do infarto e da área em risco (AAR), por phthalo corante azul e cloreto de trifenil tetrazólio (TTC), ligadura da LAD pode ser confirmada pela observação de branqueamento de tecido do miocárdio distal à sutura bem como disfunção da parede anterior. A reperfusão pode ser verificado pelo retorno da cor vermelha para o tecido do miocárdio e a demonstração de alguma recuperação do anterior movimento da parede.
As áreas de infarto (branco) deve se.......
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Discussão
Rato modelos de isquemia-reperfusão do miocárdio são um método eficaz para a pesquisa cardiovascular para simular doença cardíaca aguda ou crônica clínica 13,14. Esforço significativo tem sido aplicada para desenvolver e refinar abordagens cirúrgicas que produzem eventos isquêmicos e danos de reperfusão nos corações de vários tipos de animais diferentes. Embora existam vantagens particulares para o uso de sistemas diferentes animais, o rato tem características que levaram a extensa interesse em produzir miocá.......
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Divulgações
Dr. Noé Weisleder é um fundador e Chief Scientific Officer no TRIM-edicine, Inc.
Agradecimentos
A pesquisa relatada nesta publicação foi apoiada pelo Instituto Nacional de Artrite e Doenças Osteomusculares e de Pele, parte dos Institutos Nacionais de Saúde, sob Award Número R01-AR063084. O conteúdo é de responsabilidade exclusiva de seus autores e não representam, necessariamente, a posição oficial do National Institutes of Health.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| PhysioSuite com aquecimento homeotérmico RightTemp | de luz PS-RT | Kent Scientific Corp | |
| Zeiss | KL 1500 LCD | ||
| Mouse Heart Slicer Matrix | Zivic Miller | HSMS001-1 | |
| Micro Bandeja - Base, Tampa e Mat (6,0 x 10 x 0,75) | Ferramentas de Ciências Finas | 6100A | |
| 2,3,5-Cloreto de trifeniltetrazólio | Sigma Aldrich | T8877 | |
| Buprenorfina (Buprenex Injetável) | Reckitt Benkiser Healthcare | NDC 12496-0757-1 | |
| bupivacaína | Hospira | NDC 0409-1163-01 | |
| Isoflurano | Abbott | NDC 5260-04-05 | |
| Betadine Soultion | Purdue Pharma | 25655-41-8 | |
| Troponina Cardíaca de Camundongo T(cTnT) ELISA | Kamiya Biomedical Company | KT-58997 | |
| Tesoura Fina | Ferramentas de Ciência Fina | 14040-10 | |
| Dumont #5 Fórceps | Ferramentas de Ciências Finas | 11251-30 | |
| Dumont #3 Fórceps | Ferramentas de Ciências Finas | 11231-30 | |
| Castroviejo Micro Porta-agulhas | Fine Science Tools | 12060-01 | |
| Suporte de Agulha Alongado Fino | Fine Science | 12005-15 | |
| com Cabo Redondo | Fine Science Tools | 12075-12 | |
| Omano Trinocular Stereoscope | Microscope.com | OM99-V6 | |
| SB2 Suporte de Lança com Braço Universal | Microscope.com | Tubo Traqueal V6 | |
| , 0,5 mm, 1/16 in Y | Kent Scientific Corp | RSP05T16 | |
| Sistemas de Anestesia para Roedores e Pequenos Animais | VetEquip, Inc | 901807 | |
| 4-0 sutura de seda | Sharpoint™ Produtos | DC-2515N | |
| 6-0 sutura cônica de seda | Sharpoint™ Produtos | DC-2150N |
Referências
- Abarbanell, A. M., et al. Animal models of myocardial and vascular injury. J Surg Res. 162, 239-249 (2010).
- Gao, E., et al. A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse. Circ Res. 107,....
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Reimpressões e permissões
