Um modelo de rato para induzida por patógeno inflamação crônica no local e sistêmica Sites

Resumo

Os modelos animais provaram ser ferramentas valiosas para a definição de acolhimento e de patógenos mecanismos específicos que contribuem para o desenvolvimento da inflamação crônica. Aqui nós descrevemos um modelo do rato de infecção oral com o patógeno humano Porphyromonas gingivalis e metodologias detalhe para avaliar a progressão da inflamação em sites locais e sistêmicos.

Resumo

A inflamação crônica é um importante motor de danos no tecido patológico e uma característica unificadora de muitas doenças crônicas em seres humanos, incluindo neoplásicas, auto-imunes e doenças inflamatórias crônicas. Emergentes evidência implica inflamação crônica induzida por patógeno no desenvolvimento e progressão de doenças crônicas com uma grande variedade de manifestações clínicas. Devido à etiologia complexa e multifatorial da doença crônica, projetar experimentos para a prova do nexo de causalidade e do estabelecimento de relações mecanicistas é quase impossível em humanos. Uma vantagem da utilização de modelos animais, é que ambos os factores genéticos e ambientais que podem influenciar o curso de uma doença particular pode ser controlada. Assim, projetar modelos animais relevantes de infecção representa um passo fundamental na identificação de acolhimento e de patógenos mecanismos específicos que contribuem para a inflamação crônica.

Aqui nós descrevemos um modelo de mouse induzida por patógeno Infla crônicammation em sites locais e sistêmicos após a infecção com o patógeno Porphyromonas gingivalis via oral, uma bactéria estreitamente associada à doença periodontal humano. A infecção oral de agentes patogénicos específicos de ratos livre induz uma resposta inflamatória local, resultando na destruição de dente de apoio do osso alveolar, uma marca da doença periodontal. Em um modelo de camundongo estabelecido de aterosclerose, infecção com P. gingivalis acelera deposição de placas inflamatórias dentro da artéria inominada e sinus aórtico, acompanhado por activação do endotélio vascular, a um aumento da infiltração de células imunitárias, e a expressão elevada de mediadores inflamatórios em lesões. Nós metodologias detalhe para a avaliação da inflamação em sites locais e sistêmicos. O uso de camundongos transgênicos e bactérias mutantes definidos torna este modelo particularmente adequado para identificar tanto o hospedeiro e os fatores microbianos envolvidos na iniciação, progressão e evolução da doença. Adicionalmente podey, o modelo pode ser utilizado para o rastreio de novas estratégias terapêuticas, incluindo a vacinação e a intervenção farmacológica.

Introdução

A inflamação crônica é um importante motor de danos no tecido patológico e uma característica unificadora de muitas doenças crônicas em seres humanos. Estas doenças neoplásicas incluem, auto-imunes, doenças inflamatórias crónicas e ^um. A etiologia de muitas doenças crônicas ainda não está claro, mas entende-se complexa e multifatorial, envolvendo tanto a predisposição genética ea introdução de fatores ambientais. Enquanto os perpetuadores da inflamação permanecem ainda desconhecidos, os perfis celulares e moleculares da ativação imune sobrepõem consideravelmente com esses padrões observados na resposta do hospedeiro a patógenos ^2.

Protocolo

1. Crescimento e cultivo de bactérias

1. Streak congelado estoques de P. gingivalis 381 em placas de agar sangue anaeróbias e incubar durante 3 - 5 dias numa câmara de anaerobiose (10% _de H _2/10% de CO _2/80% N ₂₎ a 37 ° C.
2. Usar os organismos cultivados de placa para inocular 5 ml de culturas líquidas de caldo de infusão de cérebro e coração (BHI) suplementado com extracto de levedura (0,5%), hemina (10 ug / ml), e menadiona (1 ug / ml). Após O crescimento / N, transferir os 5 ml culturas em 45 ml de BHI.
3. Incubar as 50 ml culturas líquidas anaeróbia para um additional18 - 24 horas e colhe....

Resultados

Utilizando o modelo de ratinho apropriado e o regime de infecção oral, P. gingivalis induz inflamação crônica e imunopatologia no local (cavidade oral) e sítios sistêmicos (artérias) (Figura 1).

Em ratos, infecção oral com P. gingivalis induz uma resposta inflamatória local que conduz à destruição do osso alveolar dente de apoio ^8. p gingivalis infectados camundongos desenvolver respostas de anticorpos séricos para este organismo, que sã.......

Discussão

O P. gingivalis modelo infecção oral proporciona uma ferramenta valiosa para o estudo da inflamação crônica induzida por patógeno em sites locais e sistêmicos. Este modelo único permite a caracterização de ambos os mecanismos específicos de acolhimento e de patógenos que contribuem para a inflamação crônica e imunopatologia. Além disso, o modelo pode ser utilizado para o rastreio de novas estratégias terapêuticas, incluindo a imunização e a intervenção farmacológica. Os passos descritos neste protocolo descreve.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Software de análise Amira	Grupo
de Visualização Câmara anaeróbica DW Modelo Científico MG500	Microbiologia Internacional
BHI	Becton-Dickinson
Hemin	Sigma-Aldrich	51280-5G
Menadiona (Vitamina K)	Sigma-Aldrich	M5625-25G
Extrato de Levedura	Becton-Dickinson	212750
Carboximetilcelulose (viscosidade média)	Sigma-Aldrich	C-4888
Sulfametoxazol e trimetoprima suspensão oral 200 mg/40 mg por 5 ml	Hi-Tech Pharmacal	NDC 50383-823-16
μ CT 40	Fixador de Tecido Scanco
HistoChoice	Sigma-Aldrich	H2904
Sudão IV	Sigma-Aldrich	Espectrômetro S4261-25G
Vertical-bore 11.7T Avance	Bruker
Paravision	Paravision
ImageJ	NIH
Rato anti-rato F4 / 80	Serotec	MCA497R
Rato anti-rato TLR2	eBioscience	13-9021-80
Leica S4 escopo de dissecação	Leica
Microm HM 550 criostato	Microm

de Ciências211059