Injeção intramiocárdica percutânea guiada por ecocardiografia representa uma modalidade eficiente, confiável e targetable para a entrega de agentes de transferência de genes ou células no coração murino. Seguindo os passos descritos neste protocolo, o operador pode rapidamente tornar-se competente nessa técnica versátil, minimamente invasiva.
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Artigo de método
Guiada por ultra-som transtorácica intramiocárdico Injection em Ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Modelos murino de doença cardiovascular são importantes para a investigação de mecanismos fisiopatológicos e explorar potenciais terapias regenerativas. Experimentos envolvendo injeção do miocárdio são actualmente desempenhadas pelo acesso cirúrgico direto através de uma toracotomia. Enquanto conveniente quando realizada no momento de outra manipulação experimental, como a ligadura coronária, a necessidade de um procedimento invasivo para entrega intramiocárdica limita potenciais projetos experimentais. Com cada vez melhor resolução ultra-som e modalidades avançadas de imagem não invasivos, é agora possível realizar rotineiramente guiada por ultra-som, injeção intramiocárdica percutânea. Esta modalidade de forma eficiente e confiável fornece agentes para uma região alvo de miocárdio. As vantagens dessa técnica incluem a prevenção de morbidade cirúrgica, a facilidade de atingir regiões do miocárdio seletivamente sob a orientação do ultra-som, bem como a oportunidade para entregar injetado ao myocardium em vários intervalos de tempo predeterminados,. Com a técnica praticada, complicações da injeção transmural são raros, e os ratos rapidamente retornar à atividade normal na recuperação da anestesia. Seguindo os passos descritos neste protocolo, o operador com experiência básica ecocardiografia pode rapidamente tornar-se competente nessa técnica versátil, minimamente invasiva.
Introdução
A doença cardíaca é a principal causa de morte para homens e mulheres nos Estados Unidos, sendo responsável por 600 mil mortes por ano 1. Modelos murino de doença cardiovascular são extremamente importantes para a investigação de mecanismos fisiopatológicos e para explorar potenciais terapias. Entrega do Miocárdio de vetores de terapia genética, células-tronco, RNAs modificados e outros agentes terapêuticos permite a investigação de seu potencial terapêutico para doenças do coração 2-7. Atualmente, há poucas opções para entrega do miocárdio de agentes terapêuticos em modelos de ratos 6. A injeção transmural sob visualização directa é ....
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Protocolo
Todos os passos descritos foram realizados no âmbito de protocolos aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso do Hospital Infantil de Boston Animais Institucional.
1 Preparação
- Realizar avaliação anatômica e funcional cardíaca inicial por ecocardiografia antes de iniciar o protocolo de injeção, como a posição do transdutor fixo ideal para injeção transmural pode não produzir as ótimas vistas padrão para delinear a anatomia ea avaliação da função.
- A configuração da injecção é mostrado nas figuras 1A-1C. Coloque uma seringa vazia com uma agulha com bainha, para cima orientada cônicas, na braçadeira seringa....
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Resultados
A injeção transmural Murino com corante azul ou microesferas fluorescentes
A injecção de corante azul de Evan é útil para fins de treino. Logo após a injecção, o rato eutanásia e remover o coração para visualizar a localização do corante azul injectada. Figura 5 mostra um exemplo de uma injecção com sucesso, com o corante azul infiltrantes do miocárdio ao nível dos músculos papilares meados (Figura 5A, região delimitada pela linha a tracejado). Corante azul de .......
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Discussão
Biológicos podem ser entregues ao miocárdio por injecção directa intramiocárdica, injeção intrapericárdica, ou administração indireta através da corrente sanguínea. Com base em células ensaios de terapia recentes em modelos de infarto do miocárdio têm descrito uma abordagem toracotomia aberta para a entrega do material injetado 12-14. Um fator importante para o sucesso de uma intervenção terapêutica do miocárdio depende da escolha da via de parto. A dose mais elevada do local biológico é obtido por entrega in.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
TWP foi financiado pela Irish Cardiac Society Brian McGovern Travelling Fellowship. O WTP foi financiado pelo R01 HL095712 e um Prêmio de Investigador Estabelecido da AHA.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Sistema de imagem de ultrassom Vevo 2100 | Sistema de Trilho Integrado Visualsonics | ||
| Vevo III | Transdutor Visualsonics | ||
| Microscan MS400 Transdutor | Visualsonics | ||
| Microscan MS550D | Visualsonics Agulhas | ||
| PrecisionGlide | BD | 305128 | 30 G x 1 pol/2,5 cm |
| 1 cc | Exel International | 26048 | ou equivalente |
| Gastight 50 μ l seringas de vidro | Hamilton | 1705 | |
| Mancha azul tripano (0,4%) | Gibco | 15250 | ou equivalente |
| Isoflurano | Baxter | AHN3640 | ou equivalente |
| Aquasonic 100 | Parker Laboratories | (01-08) | ou |
| equivalente Microesferas de poliestireno (fluorescente vermelha) | Life Technologies | F-8842 | ou equivalente |
Referências
- Kochanek, K. D., et al. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-117 Forthcoming.
- Strauer, B. E., Steinhoff, G. 10 years of intracoronary and intramyocardial bone marrow stem cell therapy of the heart: fro....
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Reimpressões e permissões
