De modo a compreender os mecanismos celulares e moleculares subjacentes neotissue formação e desenvolvimento de estenose em válvulas cardíacas de engenharia de tecidos, foi desenvolvido um modelo murino de transplante heterotópico de válvula cardíaca. A válvula cardíaca pulmonar foi transplantado para destinatário usando o coração técnica de transplante heterotópico.
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Artigo de método
O transplante de válvula pulmonar Usando um modelo do rato de Heterotópica Transplante de Coração
Neste artigo
Resumo
Resumo
Engenharia de tecidos de válvulas cardíacas, válvulas especialmente descelularizados, estão começando a ganhar impulso no uso clínico de cirurgia reconstrutiva com resultados mistos. No entanto, os mecanismos celulares e moleculares do desenvolvimento neotissue, espessamento da válvula, e o desenvolvimento de estenose não são pesquisadas extensivamente. Para responder às perguntas acima, foi desenvolvido um modelo de transplante heterotópico murino coração válvula. A válvula cardíaca foi colhida a partir de um camundongo doador válvula e transplantadas para um doador de rato coração. O coração com uma nova válvula foi transplantado heterotopicamente a um rato destinatário. O coração transplantado mostrou o seu próprio batimento cardíaco, independente de batimentos cardíacos do destinatário. O fluxo de sangue foi quantificado usando um sistema de ultra-som de alta freqüência com Doppler pulsátil. O fluxo através da válvula pulmonar implantado mostrou a frente de fluxo com refluxo mínimo e pico de fluxo foi próximo a 100 mm / seg. Este modelo murino de transplante de válvula cardíaca é highly versátil, de modo que pode ser modificada e adaptada para fornecer diferentes ambientes hemodinâmicas e / ou pode ser usado com vários ratinhos transgénicos para estudar o desenvolvimento neotissue em uma válvula cardíaca de engenharia de tecidos.
Introdução
Defeitos cardiovasculares congênitos são uma das principais causas de mortalidade infantil no mundo 1,2 ocidental. Entre eles, a estenose da válvula pulmonar e os defeitos da válvula aórtica bicúspide são uma forma que ocorre com freqüência 3. Cirurgia de substituição da válvula cardíaca é uma escolha rotina de cirurgias reconstrutivas; no entanto, complicações, incluindo estenose e calcificação da válvula cardíaca, ea dependência ao longo da vida em anticoagulantes são uma fonte significativa de problemas de saúde crônica e morte 4-7. Além disso, a falta de potencial crescimento requer cirurgias de revisão, que aumenta ainda mais a m....
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Protocolo
Nota: Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Comitê Institucional Hospital Animal Care e Use do Nationwide Children.
1. Pulmonar Válvula Cardíaca Colheita de um doador de válvula do coração mouse
- Autoclave todos os instrumentos cirúrgicos antes da cirurgia: 1x tesoura fina, micro fórceps 3x, pinças vasculares micro 2x, braçadeira 1x fórceps de aplicação, suporte da agulha micro 1x, tesoura primavera 1x, 1x afastador.
- Um 6-8 semanas de idade fêmea C57BL / 6 de rato é usado como um doador de válvula cardíaca pulmonar. Remover o rato da sua gaiola e pesá-lo, em seguida, a eutanásia com um cocktail de cet....
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Resultados
A figura 1 ilustra o esquema do modelo de transplante de válvula cardíaca utilizando transplante cardíaco heterotópico. A válvula cardíaca foi colhida a partir de um doador e implantado em um coração de um segundo rato doador. Em seguida, o coração com a nova válvula cardíaca foi implantado no abdómen de um rato receptor. Figura 2 mostra uma ilustração do coração implantado no espaço abdominal (A), logo após o transplante de coração (B), e 5 minutos apó.......
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Discussão
A taxa de mortalidade do presente processo é de cerca de 20%, que foi principalmente causada por hemorragia no local da transplante de PV e anastomose sobre a aorta do doador para a aorta abdominal do destinatário. Na maioria dos casos, a taxa de mortalidade diminui significativamente 48 horas pós cirurgia. Os ratos de sobrevivência mostraram fortes batimentos cardíacos e do fluxo de sangue através do PV implantado. Todo o processo leva quatro horas para um cirurgião experiente micro. Levará cerca de 250 ratos para domi.......
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Divulgações
Não temos nada a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado, em parte, por uma concessão do NIH (RO1 HL098228) para CKB.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Microscópio DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Leica | M80 | ||
| C57BL/6J (H-2b), Fêmea | Jackson Laboratories | 664 | 8-12 semanas |
| Injeção de Cloridrato de Cetamina | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| Solução Estéril de Xilazina | Akorn Inc. | NADA# 139-236 | |
| Cetoprofeno | Fort Dodge Saúde Animal | NDC 0856-4396-01 | |
| Ibuprofeno | Dose de precisão | NDC 68094-494-59 | |
| Heparina Sagente | de Sódio Farmacêuticos | NDC 25021-400 | |
| Solução salina (cloreto de sódio estéril a 0,9%) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| Injeção de cloreto de sódio a 0,9% | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| Pomada Oftálmica de Petrolato | Dechra Produtos Veterinários | NDC 17033-211-38 | |
| Almofadas de Preparação de Iodo | Triad Descartáveis, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Almofadas de preparação de álcool | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Aplicadores com ponta de algodão | Fisher Sientific | 23-400-118 | |
| Tesoura fina | FST | 14028-10 | |
| Micro-Adson Fórceps | FST | 11018-12 | |
| Grampo Pinça de aplicação | FST | 00072-14 | |
| S & T Vascular Clamp | FST | 00396-01 | |
| Tesoura de Mola | FST | 15008-08 | |
| Colibri Retractors | FST | 17000-04 | |
| Dumont #5 Fórsei | FST | 11251-20 | |
| Dumont #7 - Fórceps Fino | FST | 11274-20 | |
| Dumont #5/45 Fórceps | FST | 11251-35 | |
| Tish Porta-Agulhas/ Fórceps | Micrins | MI1540 | |
| Sutura de Monofilamento de Poliamida Preta, 10-0 | AROSurgical Instruments Corporation | TI638402 | Para suturar o enxerto |
| Sutura de Monofilamento de Poliamida Preta, 6-0 | AROSurgical Instruments | SN-1956 | Para musculatura e fechamento da pele |
| Esponjas não tecidas | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Hemostático absorvível | Ethicon | 1961 | |
| Seringa de 1 ml | BD | 309659 | |
| Seringa de 3 ml | BD | 309657 | |
| Seringa de 10 ml | BD | 309604 | |
| 18 G 1 1/2 pol., Agulha | BD | 305190 | |
| 25 G 1 pol., Agulha | BD | 305125 | |
| 30 G 1 pol., Agulha | BD | 305106 | |
| Recirculador de Água Quente | Gaymar | TP-700 | |
| Almofada de Aquecimento | Gaymar | TP-22G | |
| Aparador | Wahl | 9854-500 | |
| VEVO2100 Ultrassom de Alta Frequência | VisualSonics | http://www.visualsonics.com/vevo2100 | O número de catálogo e o preço podem ser adquiridos com os representantes de vendas. |
| Gel de transmissão de ultrassom | Parker Laboratories, INC. | 01-02 | |
| Sistema de Anestesia para Animais de Laboratório de Mesa | VetEquip, INC. | ||
| Isoflurano | Baxter | 1001936060 |
Referências
- Polito, A., et al. Increased morbidity and mortality in very preterm VLBW infants with congenital heart disease. Intens Care Med. 39, 1104-1112 (2013).
- Wren, C., Reinhardt, Z., Khawaja, K. Twenty year trends in diagn....
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