A exposição do sangue a condutos sanguíneos poliméricos inicia a reação de corpo estranho que tem sido implicada em complicações clínicas. Aqui, o Chandler Loop Apparatus, uma ferramenta experimental que imita a perfusão sanguínea através desses condutos, é descrito. O apêndice do CD47 recombinante resulta em diminuição da evidência da reação de corpo estranho nesses condutos.
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Artigo de método
O uso do Ex Vivo Chandler Circuito Aparelho para avaliar a biocompatibilidade de Modificados Condutas sangue Poliméricos
Neste artigo
Resumo
Resumo
A reacção de corpo estranho ocorre quando uma superfície sintética é introduzida no corpo. Caracteriza-se por adsorção de proteínas do sangue e a subsequente ligação e activação de plaquetas, monócitos / macrófagos de adesão, e os eventos de sinalização celular inflamatório, levando a complicações pós-procedimento. O Aparelho Chandler laço é um sistema experimental que permite aos investigadores a estudar as interacções celulares e moleculares que ocorrem quando grandes volumes de sangue são perfundidos sobre condutas poliméricos. Para esse efeito, o aparelho tem sido utilizado como um modelo ex vivo, permitindo que a avaliação das propriedades anti-inflamatórias de várias modificações da superfície do polímero. Nosso laboratório mostrou que condutas de sangue, covalentemente modificadas via química fotoativação com CD47 recombinante, pode conferir biocompatibilidade de superfícies poliméricas. Acrescentando CD47 para superfícies poliméricas pode ser um meio eficaz para promover a eficácia das condutas de sangue poliméricos. Seuein é a metodologia que detalha a química fotoativação usado para acrescentar CD47 recombinante para condutas de sangue poliméricos clinicamente relevantes e com o uso do laço Chandler como um modelo experimental ex vivo para examinar interações sangue com a CD47 modificado e controle de condutas.
Introdução
Muitos procedimentos clínicos, tais como a circulação extracorpórea e diálise renal, requerem o uso de condutos de sangue poliméricas e são frequentemente associados com complicações pós-procedimento 1. Quando perfundido com sangue, estes polímeros ilícito a reação de corpo estranho (FBR), resultando na adsorção de proteínas do sangue e plaquetas, a adesão de monócitos / macrófagos e liberação de citocinas pró-inflamatórias, o que contribui para complicações pós-procedimento e / ou 2,3 falha do dispositivo. Assim, estratégias para abordar esta questão continuar a ser uma área importante e contínuo de pesquisas em biomateriais. Os pesquisadores t....
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Protocolo
1. Modificando poliméricos Superfícies com recCD47
NOTA:. O protocolo é resumido esquematicamente na Figura 1 A Figura 1A ilustra a geração de superfícies poliméricas tiol-reactivo Figura 1B ilustra a geração de recCD47 reactivo com tiol..
- Dia 1
- Prepara-se uma solução de PDT-BzPh (1 mg / ml) e bicarbonato de potássio (KHCO3) (0,7 mg / ml) em água estéril. Agita-se durante a noite a 4 ° C (protegido da luz).
- Dia 2
- Cortar tubo polimérico em 40 centímetros de comprimento (o tempo suficiente para caber em torno de rodas rotativas).
- ....
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Resultados
Gerando superfícies poliméricas tiol-reactivo por meio do uso de PDT-BzPh e TCEP juntamente com tiol-reactivo recCD47 poli-lisina usando SMCC permite a fixação de recCD47 a superfícies poliméricas. O processo de modificação é resumida esquematicamente na Figura 1. A conveniência deste processo de modificação é que ele pode ser aplicado a muitas proteínas diferentes e as diversas superfícies poliméricas diferentes, assumindo que a proteína pode ser modificado com grupos quimicamente reactivos, tais como .......
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Discussão
A química fotoativação (resumidos na Figura 1) permite a modificação de praticamente qualquer superfície de polímero que tem hidrocarbonetos suficientes para facilitar PDT-BzPh apego e irradiação UV subseqüente ao photo-ativar o PDT-BzPh. Funcionalização da superfície polimérica com grupos tiol reactivos permite a subsequente ligação de uma série de moléculas de interesse testáveis. Em nossos estudos específicos que escolhemos recombinante CD47 11-13. A conjugação química particular que utili.......
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Divulgações
A pesquisa relatada nesta publicação foi apoiada pelo Instituto Nacional de Imagem Biomédica e Bioengenharia, sob o número prêmio R21 EB015612 (SJS), e do National Heart, Lung, and Blood Institute, sob o número prêmio T32 HL007915 (JBS e RJL), da National Institute of Health.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 16% Paraformaldeído (PFA) | Thermo Scientific | 58906 | Atenção! Uso em capela |
| de exaustão 25% Glutaraldeído | VWR | AAA17876-AP | cuidado! Uso em capela de exaustão |
| 2-piridilditio, benzofenona (PDT-BzPH) | Sintetizado em laboratório | N / A | |
| Albumina de soro bovino (BSA) | Sigma | A3059-100G | |
| Citrato | Sigma | S5770-50ML | |
| Câmera digital | Leica | DC500 | Fora de produção |
| Dimetilformamida (DMF) | Sigma | 270547-100ML | Atenção! Uso em capela |
| de exaustão Dulbecco' s Phosphate Buffered Saline (DPBS) | Gibco/Life Technologies | 14190-136 | |
| Microscópio Fluorescente | Nikon | TE300 | |
| Ácido Acético Glacial | Fisher Scientific | A38-212 | Cuidado! Use em capela de exaustão |
| Humana CD47 (B6H12) - Biotecnologia Santa Cruz do anticorpo de FITC | SC-12730 | ||
| Osmium Tetroxide | Acros Organics | 197450050 | Cuidado! Uso em capela de exaustão |
| Bicarbonato de potássio (KHCO3) | Sigma | 237205-100G | |
| Fosfato de potássio monobásico (KH2PO4) | Sigma | P5655-100G | |
| (Kit de Procedimento Cardiovascular) | Terumo Cardiovascular Systems | 60050 | A maioria dos tubos de grau clínico funcionará |
| Elétron de varredura Microscópio | JEOL | JSM-T330A | |
| Cloreto de Sódio (NaCl) | Fisher Scientific | BP358-212 | |
| Leitor de Microplacas | Molecular Devices | Spectramax Gemini EM | |
| Sulfo-SMCC | Sigma | M6035-10MG | Sensível à Umidade! |
| tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP-HCl) | Thermo Scientific | 20491 | |
| Tween-20 | Bio-Rad | 170-6531 | |
| Vectashield com DAPI | Fisher Scientific | H-1200 | Sensível à luz! |
| Colunas de Dessalinização Zeba Spin – 7 K MWCO | Thermo Scientific | 89891 |
Referências
- Bruck, S. D. Medical applications of polymeric materials. Med. Prog. Technol. 9 (1), 1-16 (1982).
- Anderson, J. M., Rodriguez, A., Chang, D. T. Foreign body reaction to biomaterials. Semin. Immunol. 20 (2), 86-100 (2008).
- Levy, J. H., Tanaka, K. A.
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Reimpressões e permissões
