Nematóides entomopatogênicos são vermes que vivem no solo que parasitam uma grande variedade de insetos. Demonstramos métodos de amostragem utilizados para o isolamento destes nematóides do solo utilizando duas técnicas: a iscagem inseto ea armadilha Branco modificado, para a recuperação de nematóides de amostras de solo e cadáveres de insetos infectados, respectivamente.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Amostragem do solo e isolamento de nematóides entomopatogênicos (Steinernematidae, Heterorhabditidae)
Neste artigo
Resumo
Resumo
Nematóides entomopatogênicos (aka EPN) representam um grupo de nematóides que vivem no solo que parasitam uma grande variedade de insetos. Esses nematóides pertencem a duas famílias: Steinernematidae e Heterorhabditidae. Até agora, mais de 70 espécies já foram descritas no Steinernematidae e existem cerca de 20 espécies no Heterorhabditidae. Os nematóides têm uma parceria de mutualismo com bactérias Enterobacteriaceae e, juntos, eles agem como um complexo potente inseticida que mata uma grande variedade de espécies de insetos.
Aqui, vamos nos concentrar nas técnicas mais comuns considerados para a recolha de EPN do solo. A segunda parte desta apresentação centra-se na técnica de atracção de insectos, uma abordagem amplamente utilizada para o isolamento de EPN de amostras de solo, e a técnica de armadilha branco modificado, que é utilizado para a recuperação destes nematóides de insectos infectadas. Estes métodos e técnicas são passos fundamentais para o sucesso da criação EPN cultUres em laboratório e também servir de base para outros bioensaios que consideram estes nematóides como organismos modelo para a pesquisa em outras disciplinas biológicas. As técnicas indicadas nesta apresentação correspondem às realizadas e / ou concebida por membros da SP laboratório, bem como os descritos por vários autores.
Introdução
Muitos nematóides estão associados com insetos, e suas interações hospedeiro variam de benéfico para prejudicial. Aqui, vamos nos concentrar em um grupo de nematóides que são patógenos de insetos, também conhecido como nematóides entomopatogênicos (ou EPN). Duas famílias de nematóides pertencem a este grupo de nematóides: Steinernematidae e Heterorhabditidae 11,13. O seu efeito patogênico é de fato conferida pela sua interação com anaeróbios facultativos bactérias entéricas (bactérias Xenorhabdus associar steinernematids e bactérias Photorhabdus associar heterorhabditids) 2. As bactérias são vetorizado de um hospedeiro a outro ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
1. Coleta de Amostras de solo
- Considere que cobre uma área mínima de 2 - 4 m 2 para cada local de amostragem.
- Recolha de amostras de solo a uma profundidade de pelo menos 15 cm (Figura 4).
- Tome pelo menos 5 amostras aleatórias dentro desta área.
- Tome 3 subamostras por amostra. Dependendo do objetivo do estudo, ou combinar as subamostras ou mantê-los separados.
- Coloque cada amostra em um saco plástico. Considere duplo ensacamento para evitar vazamento de amostras (Figura 4).
- Amostras de etiquetas com um marcador à prova d'água. Inclua as seguintes informações ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Coleta de Amostras de solo
Em estágio Terceiro juvenis infectantes de EPN são os únicos estágios gratuitos de vida no ciclo de vida desses nematóides que residem no solo (Figura 1). Portanto, a recolha de amostras de solo é um método muito eficiente para recuperar estes nemátodos. Figura 4 mostra um perfil de solo que indica a profundidade a que devem ser recolhidas amostras. Preservar a umidade de uma amostra é um fator chave para a sobrevivência dos nemató.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Esta demonstração é a primeira de duas apresentações que descrevem um número de técnicas que são comummente usados para estudar EPN e suas bactérias simbióticas. Estas técnicas representam passos fundamentais para o sucesso da criação culturas EPN em laboratório e também servir de base para outros bioensaios que empregam EPN como organismos modelo para a pesquisa.
Vários levantamentos de solos de EPN têm mostrado que a sua abundância e distribuição pode variar entre estações, habitats e re.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer aos membros anteriores do Banco de laboratório: Sam-Kyu Kim, Kathryn Plichta e Victoria Miranda-Thompson por suas contribuições para a melhoria de muitos destes protocolos. Agradecemos o apoio da National Science Foundation (subvenções IOS-0840932 e IOS-0724978) a SP estoque.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Galleria mellonella | Timberline | http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG | Para técnica de isca de insetos |
| Papel de filtro, 55 mm Grau 1 Celulose | Whatman/VWR | 28450-048 | Conjunto de câmara de infecção e armadilha branca |
| 60 x 15 mm Placas de Petri | VWR | 25384-092 | Câmara de infecção e conjunto de armadilha branca |
| Placas de Petri de 100 x 15 mm | VWR | 25384-088 | Câmara de infecção e conjunto de armadilha branca |
| Sacos de plástico ZIPloc | Ace Hardware ou loja | Amostragem de solo | |
| Pipetador mecânico P1000, P200 ml | VWR | 89130-562; 89130-566 | Câmara de infecção e conjunto de armadilha branca |
| Pontas de pipetor 1000ml, 200 ml | VWR | 16466-004 ; 53510 | Câmara de infecção e conjunto de armadilha branca |
| Bleach | Ace Hardware ou loja | Amostragem de solo , desinfecção | |
| Hipoclorito de sódio | Ace Hardware ou loja | Amostragem de solo , desinfecção | |
| 70% Etyl alochol | AAPER | 17212945 | Amostragem de solo , desinfecção |
| Pás | Ace Hardware ou loja de ferragens local | N/A | Amostragem de solo |
| Amostrador de solo tubular | Accuproducts | Amostragem de solo | |
| Sonda de solo, cabo longo | Nupla | PRB4T 69401 Amostragem de | solo |
| Fita métrica | Ace Hardware ou loja | Amostragem de solo | |
| Fita de sinalização, várias cores | Ace Hardware ou loja | Amostragem de solo | |
| Frascos de cultura de tecidos | VWR | Falcon, 29185-304 | Armadilha branca, coleção de EPN |
| Frascos de polietileno de boca larga | VWR | 16650-107 | Sifão branco, coleção de EPN |
Referências
- Bedding, R. A., Akhurst, R. J. A simple technique for the detection of insect parasitic rhabditid nematodes in soil. Nematologica. 21, 109-110 (1975).
- Boemare, N. E., Akhurst, R. A. The Genera Photorhabdus and Xenorhabdus. In The Prokaryotes. Dworkin, M., Falkow, S., Rose....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
