Rato Transplante Renal: Modelos de rejeição de enxertos

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para estudar a imunologia da rejeição. O modelo cirúrgico apresentado relata um curto tempo operatório e uma técnica concisa. Dependendo da combinação de cepas doador-receptor, o rim transplantado pode desenvolver rejeição celular aguda ou dano crônico ao aloenxerto, definido por fibrose intersticial e atrofia tubular.

Resumo

A rejeição do rim transplantado em humanos ainda é uma das principais causas de morbidade e mortalidade. O modelo de transplante renal em camundongos replica de perto os processos técnicos e patológicos que ocorrem no transplante renal humano. Embora existam modelos de camundongos de rejeição alogênica em outros órgãos que não o rim e sejam mais tecnicamente viáveis, há evidências de que diferentes órgãos provocam modos e dinâmicas de rejeição díspares, por exemplo, o curso do tempo de rejeição no aloenxerto cardíaco e renal difere significativamente em certas combinações de cepas. Este modelo é uma ferramenta atraente por muitas razões, apesar de seus desafios técnicos. Como os haplótipos de cepas de camundongos endogâmicos são bem caracterizados, é possível escolher combinações de doadores e receptores para modelar a rejeição aguda do aloenxerto por transplante em loci MHC classe I e II. Por outro lado, pelo transplante entre cepas com haplótipos semelhantes, um processo crônico pode ser provocado onde o rim do aloenxerto desenvolve fibrose intersticial e atrofia tubular. Modificamos a técnica cirúrgica para reduzir o tempo cirúrgico e melhorar a facilidade da cirurgia, porém ainda é preciso superar uma curva de aprendizado para replicar fielmente o modelo. Este estudo fornecerá pontos-chave no procedimento cirúrgico e auxiliará no processo de estabelecimento dessa técnica.

Introdução

Transplante renal bem sucedido para o tratamento da insuficiência renal foi descrita pela primeira vez em 1955 entre gêmeos monozigóticos ^1, desde então, tornou-se um tratamento revolucionário para pacientes com insuficiência renal terminal em todo o mundo, oferecendo a melhoria da esperança e qualidade de vida ^2. No entanto sobrevida do enxerto a longo prazo tem sido dificultado por uma multidão de processos patológicos, resultando em danos crônica do enxerto ^3.

A rejeição do rim transplantado em humanos continua a ser uma das principais causas de morbidade, apesar das melhorias significativas nos regimes....

Protocolo

Ética institucionais nacionais e locais apropriados devem estar no local antes de realizar experimentos com animais. Especificamente no Reino Unido os seguintes experimentos foram realizados sob os Animais (Scientific Procedures) Act 1986 Onde dois microsurgeons disponíveis para operar simultaneamente o cirurgião doador deve executar os passos 1,1-1,16 então 3.1 a 3.5, enquanto o cirurgião realiza destinatário 2,1-2,8 . Para um único operador os passos podem ser seguidos sequencialmente.

1. Doador Preparação

Nota: O procedimento aqui apresentado é de um doador C57BL / 6 ^BM12 e destinatário C57BL / 6, ....

Resultados

A rejeição do aloenxerto renal pode ser avaliada através da análise histológica de secções de tecido embebidos em parafina fixados com Methacarn do rim transplantado (Figura 2). Transplante de rins entre isoenxerto resultados ratos sing�icas em renal lesão de reperfusão isquêmica, porém por 4 semanas, os túbulos se recuperaram e são histologicamente comparável à rins nativos. A rejeição aguda pode ser modelado por C57BL / 6 em receptores de transplante de rim de BALB / c, no prazo de 1 semana, há infi.......

Discussão

A forma mais bem descrito a anastomose arterial é usar a aorta distai do doador, com a artéria renal em continuação, de uma maneira extremo-a-lado para o aorta do receptor. Descreve-se o uso de um tapa-aórtica, semelhante ao espelhamento 'Carrell remendo "que realizou no transplante de rim humano que acreditamos ser mais conveniente. Apesar de relatos na literatura de doador e receptor operatório tempo são escassos, acreditamos que a utilização de um remendo da aorta para aorta destinatário em vez de ponta-a-la.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Instrumentos Cirúrgicos
Tesouras de Dissecção Blunt	Ferramentas de Ciência Fina	14072-10	Para corte de pele
Tesoura Castoviejo curvada	Ferramentas de Belas Ciências	15017-10	Para corte de tecidos
Tesouras de mola - retas	Ferramentas de Ciências Finas	15000-08	Para corte de sutura
Pinça dentada 1x2 dentes	Ferramentas de Ciências Finas	11021-12
2 x pinças de ponta fina (Dumont No.5)	Ferramentas de Ciências Finas	11251-20
Pinça de ponta fina angular (Dumont No. 5/45)	Ferramentas de ciência fina	11253-25	Para dissecação sem corte
Pinça de ponta fina curva (Dumont No.7)	Ferramentas de ciência fina	11273-22	Útil para passar vasos
Hemostato de cril curvo	Ferramentas de ciência fina	1300-04
Aplicador de micro clipe com trava	Ferramentas de ciência fina	18056-14
2 x Micro serrefines largura da mola 2mm, comprimento da mandíbula 4mm	Fine Science Tools	18055-04	Grampos microvasculares
2 x Colibri 3cm afastador de fio	Fine Science Tools	17000-03
Porta-agulha Castroviejo com trava	Fine Science Tools	120660-01
Aplicador de clipe de ferida	Fine Science Tools	12031-07
Clipes de ferida de 7mm	Fine Science Ferramentas	12032-07	Remover 7 a 10 dias após a cirurgia
Equipamento
Microscópio pico OPMI	Zeiss	S100
Unidade de cautério térmico com ponta	fina Geiger	150A
Almofada eletrônica	de calor Cozee Cumfort	n/a
Euroklav 23-S	Melag	n/a	Autoclave
Descartável equipamento
7/O Sutura trançada de seda	Pearsall	30514
10/O Dafilon (poliamida) sutura	B-Braun
6/O Vicryl (plygalectin)	Ethicon	W9537
Agulha chanfrada regular, 1 polegada, 21G	Bection, Dickinson and Company	305175	Para anastamose ureteral
Agulha chanfrada regular, 5/8 polegada, 25G	Bection, Dickinson and Company	305122
Agulha chanfrada regular, 1/2 polegada, 30G	Bection, Dickinson and Company	304000
Agulha de insulina 1ml, 29G	Bection, Dickinson and Company	324827
Agulha de insulina 0,3ml, 30G	Bection, Dickinson and Company	324826
ponta deslizante da seringa de 1 ml	Bection, Dickinson and Company	300184
ponta deslizante da seringa de 5 ml	Bection, Dickinson and Company	302187
Cotonetes de papel Wypall	Kimberley-Clark	L40	esterilizado por autoclave
Botões de algodão	Johnson e Johnson	n/a	esterilizados por autoclave
Cortinas lisas	Guardian	CB03	esterilizado por autoclave
Placa de cultura de células 60mm x 15mm	Corning Incorporated	430166
Pino de distribuição	B-Braun	DP3500L / 413501	Usado com NaCl 0,9%
Reagentes e Medicamentos
(Lacri-Lube) Parafina branca macia 57,3%, óleo mineral 42,5% e álcoois de lanolina 0,2%	Allergan Ltd	21956GB10X
(Videne) Iodopovidona 10%	Ecolab Ltd	PL 04509/0041
(Vetalar V) Cloridrato de cetamina	Pfizer Animal Health	Vm 42058/4165	Solução 100mg/ml (dose 200mg/kg)
(Domitor) Cloridrato de medetomidina	Orion Pharma	Vm 06043/4003	1mg/ml (dose 0.5mg/kg)
(Vetergesic) Cloridrato de Bupernorfina	Alsto Animal Health	Vm 00063/4002	0,3mg/ml (dose 0,05mg/kg
)(Antisedan) Hidrocorido de atipamezol	Orion Pharma	Vm 06043/4004	5mg/ml (dose 2mg/kg)
Solução da Universidade de Wisconsin	Belzer Bridge to Life	n/a	dose de aproximadamente 500 microlitros/camundongo
NaCl 0,9%	Baxter	FKE1323
Sulfato de heparina	não patenteado	N/A	5000 unidades/ml (dose de 5 unidades/camundongo)

Carl G1118099