Avaliação da viabilidade de gordura humana injecção em ratinhos nu com Micro-Tomografia Computadorizada

Resumo

A lipoenxertia é uma técnica essencial para a reconstrução de déficits de tecidos moles. No entanto, continua sendo um procedimento imprevisível caracterizado por sobrevida variável do enxerto. Nosso objetivo foi criar um modelo de camundongo que utiliza um novo método de imagem para comparar a retenção de volume entre diferentes técnicas de preparação e entrega de enxerto de gordura.

Resumo

Lipotransfer é uma ferramenta essencial em arsenal do cirurgião para o tratamento de défices de tecidos moles de todo o corpo. A gordura é o ideal de enchimento de tecido mole, uma vez que é prontamente disponível, facilmente obtido, de baixo custo, e inerentemente biocompatível. ¹ No entanto, apesar da sua popularidade crescente, enxerto de gordura é dificultada pelos resultados imprevisíveis e sobrevivência do enxerto variável, com as taxas de retenção publicados que variam de 10 -80%. ^1-3

Para facilitar a investigação sobre o enxerto de gordura, que, por conseguinte, ter desenvolvido um modelo animal que permite a análise em tempo real de retenção do volume injectado gordura. Em resumo, um pequeno corte é feito no couro cabeludo de um ratinho nu CD-1 e 200-400 ul de lipoaspirado processado é colocado sobre o crânio. O couro cabeludo é escolhido como o local receptor por causa da sua ausência de gordura subcutânea nativa, e por causa da excelente contraste de base fornecida pela calote craniana, o que ajuda nao processo de análise. Tomografia Micro-computadorizada (micro-CT) é usado para digitalizar o enxerto na linha de base e cada duas semanas. As imagens de TC são reconstruídos, e um software de imagem é usado para quantificar os volumes de garfo.

Tradicionalmente, as técnicas para avaliar o volume de enxerto de gordura exigiram a eutanásia do animal estudo para fornecer apenas uma única avaliação de peso e volume do enxerto por medição física ex vivo. Comparações bioquímicos e histológicos têm igualmente necessária o animal estudo a ser sacrificados. Esta técnica de imagem descrita oferece a vantagem de visualizar e quantificar objetivamente o volume em diferentes períodos após a enxertia inicial sem ter que sacrificar o animal estudo. A técnica é limitada pelo tamanho da prótese capaz de ser injectado como enxertos de pele de riscos maiores e necrose gordura. Este método tem utilidade para todos os estudos que avaliam a viabilidade do enxerto de gordura e retenção de volume. Ele é particularmente bem adaptado para Providing uma representação visual do enxerto de gordura e seguindo as variações de volume ao longo do tempo.

Introdução

Os defeitos dos tecidos moles surgem de uma variedade de causas, incluindo trauma, ressecção tumoral, envelhecimento e anomalia congênita. Eles podem ser debilitantes para os pacientes e representam um dos problemas mais comuns, mas desafiadores, para os cirurgiões reconstrutivos. Existem muitos métodos para tratar deficiências de tecidos moles, como retalhos locais e livres, injeções de colágeno e preenchimentos sintéticos. ^4-8 No entanto, desde seu primeiro uso documentado por Neuber em 1893¹, a transferência de gordura autóloga continua sendo o padrão-ouro para o reparo de déficits de tecidos moles, pois está pronta, é fácil e segura de colher....

Protocolo

NOTA: Os protocolos experimentais e formulários de consentimento dos pacientes para a obtenção de gordura foram revisadas e aprovadas pela Universidade Institutional Review Board Stanford (Protocolo nº 2188). Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Painel Administrativo Stanford em Laboratory Animal Care (APLAC) sob o protocolo nº 9999. Todos os experimentos foram realizados com a estrita observância a segurança do animal e orientações de cuidados humanos.

1. Fat colheita

1. Utilizando o procedimento Coleman ^17-19, obter o tecido adiposo humano do abdômen, flanco, e / ou regiões da coxa de pacientes saud....

Resultados

Enxertos de gordura diminuiu progressivamente em volume durante o curso do estudo, resultando em 62,2% de sobrevivência médio por Semana 8. (Figura 4A) ²⁴ Após a conclusão da verificação Semana 8, cada enxerto de gordura foi extraída em uma única peça. Utilizou-se um teste da soma de Wilcoxan para comparar a diferença entre as medições de volume de enxerto de gordura obtidos por ambos os micro-CT ou calculados a partir de massa física. Não foi encontrada diferença significativa entre os dois .......

Discussão

Até este ponto, a maioria dos pesquisadores basearam-se em modalidades não geradores de imagem para quantificar a sobrevivência a longo prazo de enxertos de gordura, mas estes métodos requerem o sacrifício do animal estudo e produzirá apenas uma única medição. ^3,10-12 Nosso estudo representa um método de análise melhorada que permite objectivo, a quantificação em tempo real de sobrevivência do enxerto de gordura num modelo de ratinho.

Crítica neste processo é assegurar que os rato.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Centrífuga lipoaspirada
	Beckman Coulter, Inc., Pasadena, CA
Tubos cônicos de 50 ml	BD Biosciences, San Jose, CA
Camundongos nus CD-1 (Crl: CD1-Foxn1nu< / sup>)	Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA
Isoflurano	Henry Schein, Dublin, OH
2,5% Betadine	Purdue Pharma, L.P., Stamford, CT
Solução de etanol a 70%	Gold Shield, Hayward, CA
Seringa luer-lock de 1cc	BD Biosciences, San Jose, CA
Cânula de calibre 14	Shippert Medical, Centennial, CO
Forceps	Fine Science Tools, Heidelberg, Alemanha
Tesoura de tenotomia	Fine Science Tools, Heidelberg, Alemanha
6-0 sutura de nylon	Ethicon, Blue Ash, OH
Phosphate tampolado com solução salina	Gibco, Carlsbad, CA
micro-CT scanner	Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Phantom	TriFoil Imaging, Northridge, CA
Software de análise de imagem	IRW, Siemens Healthcare, Pleasanton, CA
Scale	Mettler-Toledo International, Inc., Columbus, OH

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