Atacante Genetics telas usando macrófagos para Identificar<em&gt; Toxoplasma gondii</em&gt; genes importantes celular para Resistance to-IFN-γ Dependente Immunity Autónoma

Odaelys Walwyn; Sini Skariah; Brian Lynch; Nathaniel Kim; Yukari Ueda; Neal Vohora; Josh Choe; Dana G. Mordue

doi:10.3791/52556

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Artigo de método

Atacante Genetics telas usando macrófagos para Identificar

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DOI:

10.3791/52556

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12 de março de 2015

Odaelys Walwyn^*¹ , Sini Skariah^*¹ , Brian Lynch¹ , Nathaniel Kim¹ , Yukari Ueda¹ , Neal Vohora¹ , Josh Choe¹ , Dana G. Mordue¹

¹Department of Microbiology and Immunology, New York Medical College

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

A genética avançada é uma abordagem poderosa para identificar genes em patógenos intracelulares importantes para a resistência à imunidade autônoma celular. A abordagem atual usa células imunes inatas, especificamente macrófagos, para identificar novos genes de Toxoplasma gondii importantes para a evasão imunológica.

Resumo

Toxoplasma gondii, o agente causador da toxoplasmose, é um patógeno protozoário intracelular obrigatório. O parasita invade e se replica em praticamente qualquer tipo de célula vertebrada de sangue quente. Durante a invasão parasitária de uma célula hospedeira, o parasita cria um vacúolo parasitóforo (PV) que se origina da membrana da célula hospedeira, independente da fagocitose dentro da qual o parasita se replica. Embora a imunidade inata dependente de IFN e mediada por células seja importante para o eventual controle da infecção, as células imunes inatas, incluindo neutrófilos, monócitos e células dendríticas, também podem servir como veículos para a disseminação sistêmica do parasita no início da infecção. É descrita uma abordagem que utiliza a resposta imune inata do hospedeiro, neste caso macrófagos, em uma triagem genética direta para identificar mutantes parasitas com defeito de aptidão em macrófagos infectados após a ativação, mas invasão e replicação normais em macrófagos virgens. Assim, a tela isola mutantes parasitas que apresentam um defeito específico em sua capacidade de resistir aos efeitos da ativação de macrófagos. O artigo descreve dois fenótipos amplos de parasitas mutantes após a ativação de macrófagos infectados: estase do parasita versus degradação do parasita, geralmente em vacúolos amorfos. Os mutantes do parasita são então analisados para identificar os genes do parasita responsáveis especificamente importantes para a resistência aos mediadores induzidos da imunidade autônoma celular. O artigo apresenta uma abordagem geral para a triagem genética direta que, em teoria, pode ser modificada para direcionar genes de parasitas importantes para a resistência a mediadores antimicrobianos específicos. Também descreve uma abordagem para avaliar os mediadores antimicrobianos específicos de macrófagos aos quais o parasita mutante é suscetível. A ativação de macrófagos infectados também pode promover a diferenciação do parasita do estágio de taquizoíto para bradizoíto que mantém a infecção crônica. Portanto, é apresentada uma metodologia para avaliar a importância do gene do parasita identificado para o estabelecimento da infecção crônica.

Introdução

Toxoplasma gondii (T. gondii) é uma intracelular obrigatório, patógeno protozoários. É o agente causador da toxoplasmose, um perigo para a saúde em indivíduos imunocomprometidos. É também o sistema modelo para outros agentes patogénicos apicomplexan que infectam os seres humanos, incluindo o Cryptosporidium e Cyclospora. A toxoplasmose é mais comumente adquirida através da ingestão de alimentos ou água contaminados com a bradyzoite ou oocisto fase do parasita. Após a ingestão, estes estágios converter ao palco taquizoíto do parasita que se replica dentro das células hospedeiras e divulga sistemicamente. As células T, IFN-γ e, em menor grau, o óxido ....