Avaliação do tumor infiltrantes Leucócitos Subconjuntos em um modelo de tumor subcutâneo

Russell K. Pachynski; Alexander Scholz; Justin Monnier; Eugene C. Butcher; Brian A. Zabel

doi:10.3791/52657

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Artigo de método

Avaliação do tumor infiltrantes Leucócitos Subconjuntos em um modelo de tumor subcutâneo

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DOI:

10.3791/52657

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13 de abril de 2015

Russell K. Pachynski¹ , Alexander Scholz³ , Justin Monnier²^,³ , Eugene C. Butcher³ , Brian A. Zabel²

¹Division of Oncology, Department of Medicine, Washington University School of Medicine, ²Palo Alto Institute for Research and Education, Veterans Affairs Palo Alto Health Care System, ³Laboratory of Immunology and Vascular Biology, Department of Pathology, Stanford University School of Medicine

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve um método para a avaliação detalhada de subconjuntos de leucócitos dentro do microambiente tumoral em um modelo de tumor de camundongo. Células de melanoma B16 que expressam chemerina foram implantadas por via subcutânea em camundongos singênicos. As células do microambiente tumoral foram então coradas e analisadas por citometria de fluxo, permitindo análises detalhadas de subconjuntos de leucócitos.

Resumo

Células imunitárias especializadas que se infiltram no microambiente tumoral regulam o crescimento e sobrevivência de neoplasia. As células malignas deve iludir ou subverter as respostas imunes anti-tumorais, a fim de sobreviver e prosperar. Tumores tirar vantagem de uma série de diferentes mecanismos de imune "fuga", incluindo o recrutamento de tolerogénico DC, as células T reguladoras imunossupressores (Tregs), e células supressoras derivadas de mielóides (MDSC) que inibem as respostas anti-tumorais citotóxicos. Por outro lado, as células efectoras imunes anti-tumor pode retardar o crescimento e expansão de tumores malignos: células dendríticas imunoestimulantes, células natural killer, que abrigam a imunidade anti-tumoral inato, e células T citotóxicas todos podem participar na supressão tumoral. O equilíbrio entre pró e anti-tumorais leucócitos última análise, determina o comportamento e destino das células transformadas; uma série de estudos clínicos humanos deram isso. Assim, a análise detalhada de subconjuntos de leucócitos dentroo microambiente do tumor tornou-se cada vez mais importante. Aqui, nós descrevemos um método para a análise de subconjuntos de leucócitos que se infiltram presentes no microambiente tumoral num modelo de tumor de rato. Células tumorais de melanoma B16 de rato foram inoculadas subcutaneamente em ratinhos C57BL / 6. Em um determinado momento, tumores e pele circundante foram ressecados em bloco e transformadas em suspensões de células individuais, que foram então coradas para multi-color citometria de fluxo. Usando uma variedade de marcadores de leucócitos subconjunto, fomos capazes de comparar as percentagens relativas de se infiltrar em subconjuntos de leucócitos entre controle e tumores que expressam chemerin. Os investigadores podem usar essa ferramenta para estudar a presença imune no microambiente do tumor e quando combinado com medidas de tamanho calibre tradicionais de crescimento do tumor, irá potencialmente permitir-lhes para elucidar o impacto das mudanças na composição imune no crescimento do tumor. Uma tal técnica pode ser aplicada a qualquer modelo de tumor em que o tumor e o seu microambiente cum ser ressecado e processado.

Introdução

O equilíbrio entre o crescimento do tumor e de promoção de regressão é, em parte, dependente do balanço de leucócitos tumor infiltrando pró e anti-presentes no microambiente ^1,2. A fim de estudar o microambiente tumoral (TME) e especificamente identificar as subpopulações de leucócitos infiltrantes, foi desenvolvido um método para a avaliação dos tumores subcutâneos em um modelo de tumor de murino. A importância de se estudar o microambiente do tumor é bem conhecido e apoiado na literatura. Numerosos estudos têm mostrado que o equilíbrio de pro- e anti-tumorais infiltrado de células imunitárias pode ter impacto nos resultados do crescimento do tumor, não s....