Osso meio condicionado: Preparação e Bioensaio

Summary

Descrevemos aqui como preparar meio-bone condicionado (BCM) e testar a sua actividade in vitro.

Abstract

Enxertos ósseos autólogos são amplamente utilizados em cirurgia oral e maxilofacial, ortopedia, traumatologia e. Enxertos ósseos autólogos não só substituir osso em falta, eles também suportam o complexo processo de regeneração óssea. Esse comportamento favorável dos auto-enxertos é atribuído às três características: osteocondutividade, osteogenicidade, e osteoindutividade. No entanto, há um outro aspecto: Enxerto ósseo libertar uma miríade de moléculas, incluindo factores de crescimento, que podem direcionar as células mesenquimatosas envolvidas na regeneração óssea. As propriedades parácrinos de enxertos de osso pode ser estudada in vitro através da utilização de meio condicionado de ossos (BCM). Aqui apresentamos um protocolo sobre como preparar o meio-condicionado de osso nativo osso cortical suíno e osso que foram submetidos a tratamento térmico ou desmineralização. As células podem ser directamente exposta à BCM ou semeados em biomateriais, tais como membranas de colágeno, previamente embebidos com BCM. Nós damos exemplos de in vitro bioassays com células mesenquimais sobre a expressão de TGF-β genes regulados. Os protocolos apresentados devem incentivar a revelar ainda mais os efeitos parácrinos de enxertos ósseos durante a regeneração óssea e abrir um caminho para a investigação translacional no amplo campo da cirurgia reconstrutiva.

Introduction

Ósseo autólogo é amplamente utilizado para preencher defeitos que ocorreram como consequência de malformação, a cirurgia ressectivo, a cirurgia reconstrutiva trauma, e antes da colocação do implante ^1,2. Compreender os princípios biológicos de como enxertos ósseos apoiar o processo de consolidação do enxerto não é única chave para entender porque auto-enxertos são considerados o padrão-ouro em cirurgia reconstrutiva, também é biônico para o projeto melhorado de substitutos ósseos ^3. Ainda assim, a consolidação do enxerto é mais rápido com ósseo autólogo em comparação com osso substitui ^4,5. Assim, é imperativo para revelar os mecanism....

Protocol

1. Preparação BCM

1. Obter mandíbulas de porco do talho local o mais fresco possível. Coloque as mandíbulas em uma superfície firme e liberar um retalho de espessura total com especial atenção para não deixar qualquer tecido mole ou periósteo fixados ao osso. Trabalhar em um ambiente limpo, sem a necessidade de trabalhar sob o capô fluxo.
2. Uma vez que um retalho de espessura total é liberado, use um raspador de osso para colher as lascas de osso do lado vestibular. Por favor note que o raspador ósseo tem de ser afiado. Manusear com firmeza o raspador ósseo e com movimentos longos recolher o osso. Descarte fragmentos de ossos menores que um milímetro.....

Results

Osso meio condicionado é preparado a partir frescos fragmentos de ossos suína. Descrição geral do processo para preparar e utilizar BCM biomateriais em combinação com BCM é mostrado na Figura 1 e Figura 2, respectivamente. Durante a preparação BCM, é importante obter grandes fragmentos de ossos com movimentos longos como movimentos curtos ou muito pequenos fragmentos de ossos pode afetar a qualidade do BCM final. Qualidade de o BCM pode ser controlada através da análise da expressão gén.......

Discussion

Meio condicionado por óssea reflecte a actividade libertada de enxertos de osso durante os estágios iniciais de regeneração óssea. O protocolo aqui descrito pode ser adaptado para estudar a resposta de diferentes tipos de células envolvidas na regeneração óssea. Além disso, o protocolo pode ser utilizado para preparar o meio condicionado a partir de agentes de enchimento de osso ou ossos processados. Os métodos são fáceis de realizar e contam com um conceito simples: os fatores libertados por várias osso nativo e proces.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mandíbulas	de porco Raspador de osso bucher
	Hu-Friedy	PPBUSE2/36
Antibióticos e Antimicotics	All life Technologies	15240-062
Membranas de Colágeno (Bio-Gide)	Geistlich
Soro Fetal de Bezerro	Invitrogen Corporation	16030074
DMEM	Invitrogen Corporation	21885-025
Kit de Isolamento de RNA de Alta Pureza	Roche	11828665001
Transcritor First Kit de Síntese de cDNA de Fita	Roche	4379012001
Primers	Microsynth
SYBR Green (para Q-RT-PCR)Roche		4673484001
PBS	Roche	11666789001