Descrevemos aqui como preparar meio-bone condicionado (BCM) e testar a sua actividade in vitro.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Osso meio condicionado: Preparação e Bioensaio
Neste artigo
Resumo
Resumo
Enxertos ósseos autólogos são amplamente utilizados em cirurgia oral e maxilofacial, ortopedia, traumatologia e. Enxertos ósseos autólogos não só substituir osso em falta, eles também suportam o complexo processo de regeneração óssea. Esse comportamento favorável dos auto-enxertos é atribuído às três características: osteocondutividade, osteogenicidade, e osteoindutividade. No entanto, há um outro aspecto: Enxerto ósseo libertar uma miríade de moléculas, incluindo factores de crescimento, que podem direcionar as células mesenquimatosas envolvidas na regeneração óssea. As propriedades parácrinos de enxertos de osso pode ser estudada in vitro através da utilização de meio condicionado de ossos (BCM). Aqui apresentamos um protocolo sobre como preparar o meio-condicionado de osso nativo osso cortical suíno e osso que foram submetidos a tratamento térmico ou desmineralização. As células podem ser directamente exposta à BCM ou semeados em biomateriais, tais como membranas de colágeno, previamente embebidos com BCM. Nós damos exemplos de in vitro bioassays com células mesenquimais sobre a expressão de TGF-β genes regulados. Os protocolos apresentados devem incentivar a revelar ainda mais os efeitos parácrinos de enxertos ósseos durante a regeneração óssea e abrir um caminho para a investigação translacional no amplo campo da cirurgia reconstrutiva.
Introdução
Ósseo autólogo é amplamente utilizado para preencher defeitos que ocorreram como consequência de malformação, a cirurgia ressectivo, a cirurgia reconstrutiva trauma, e antes da colocação do implante 1,2. Compreender os princípios biológicos de como enxertos ósseos apoiar o processo de consolidação do enxerto não é única chave para entender porque auto-enxertos são considerados o padrão-ouro em cirurgia reconstrutiva, também é biônico para o projeto melhorado de substitutos ósseos 3. Ainda assim, a consolidação do enxerto é mais rápido com ósseo autólogo em comparação com osso substitui 4,5. Assim, é imperativo para revelar os mecanism....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
1. Preparação BCM
- Obter mandíbulas de porco do talho local o mais fresco possível. Coloque as mandíbulas em uma superfície firme e liberar um retalho de espessura total com especial atenção para não deixar qualquer tecido mole ou periósteo fixados ao osso. Trabalhar em um ambiente limpo, sem a necessidade de trabalhar sob o capô fluxo.
- Uma vez que um retalho de espessura total é liberado, use um raspador de osso para colher as lascas de osso do lado vestibular. Por favor note que o raspador ósseo tem de ser afiado. Manusear com firmeza o raspador ósseo e com movimentos longos recolher o osso. Descarte fragmentos de ossos menores que um milímetro.....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Osso meio condicionado é preparado a partir frescos fragmentos de ossos suína. Descrição geral do processo para preparar e utilizar BCM biomateriais em combinação com BCM é mostrado na Figura 1 e Figura 2, respectivamente. Durante a preparação BCM, é importante obter grandes fragmentos de ossos com movimentos longos como movimentos curtos ou muito pequenos fragmentos de ossos pode afetar a qualidade do BCM final. Qualidade de o BCM pode ser controlada através da análise da expressão gén.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Meio condicionado por óssea reflecte a actividade libertada de enxertos de osso durante os estágios iniciais de regeneração óssea. O protocolo aqui descrito pode ser adaptado para estudar a resposta de diferentes tipos de células envolvidas na regeneração óssea. Além disso, o protocolo pode ser utilizado para preparar o meio condicionado a partir de agentes de enchimento de osso ou ossos processados. Os métodos são fáceis de realizar e contam com um conceito simples: os fatores libertados por várias osso nativo e proces.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores não têm nada a revelar. Jordi Caballé-Serrano recebeu uma bolsa da Fundação de Pesquisa Dental e da Educação, Basileia, Suíça.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer a Catherine Solioz por sua assistência habilidosa.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Mandíbulas | de porco Raspador de osso bucher | ||
| Hu-Friedy | PPBUSE2/36 | ||
| Antibióticos e Antimicotics | All life Technologies | 15240-062 | |
| Membranas de Colágeno (Bio-Gide) | Geistlich | ||
| Soro Fetal de Bezerro | Invitrogen Corporation | 16030074 | |
| DMEM | Invitrogen Corporation | 21885-025 | |
Kit de Isolamento de RNA de Alta Pureza | Roche | 11828665001 | |
| Transcritor First Kit de Síntese de cDNA de Fita | Roche | 4379012001 | |
| Primers | Microsynth | ||
| SYBR Green (para Q-RT-PCR)Roche | 4673484001 | ||
| PBS | Roche | 11666789001 |
Referências
- Buser, D. Long-term Stability of Early Implant Placement with Contour Augmentation. Journal of dental research. , (2013).
- Chiapasco, M., Casentini, P., Bone Zaniboni, M. augmentation procedures in implant dentistry. The International jour....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
