Aqui, apresentamos um protocolo para encapsulamento de células catabólicas, que consomem lipídios para produção de calor no tecido adiposo intra-abdominal e aumentam a dissipação de energia em camundongos obesos.
Artigo de método
Aqui, apresentamos um protocolo para encapsulamento de células catabólicas, que consomem lipídios para produção de calor no tecido adiposo intra-abdominal e aumentam a dissipação de energia em camundongos obesos.
Encapsulamento celular foi desenvolvido para reter células viáveis dentro das membranas semi-permeáveis. As células encapsuladas podem trocar enxertados metabolitos de baixo peso molecular em tecidos do hospedeiro a ser tratado para conseguir a sobrevivência a longo prazo. A membrana semipermeável permite enxertados células encapsuladas para evitar a rejeição pelo sistema imunológico. O processo de encapsulação foi concebido para permitir uma libertação controlada de compostos bioactivos, tais como insulina, hormonas, e outras citoquinas. Descrevemos aqui um método para a encapsulação de células catabólicos, que consomem lípidos para a produção de calor e dissipação de energia (termogénese) no tecido adiposo intra-abdominal de ratos obesos. A encapsulação de células catabólicos termogénicos podem ser potencialmente aplicáveis para a prevenção e tratamento da obesidade e diabetes do tipo 2. Uma outra aplicação potencial das células catabólicos pode incluir a desintoxicação de álcoois ou outros metabolitos tóxicos e poluentes ambientais.
Aumento da incidência de doenças crônicas um tem estimulado estudos sobre o transplante de populações de células terapêuticas 2. Ou células-tronco alogénicas, isogénicas são os tipos de células mais comumente utilizados para estas aplicações 2. No entanto, estes tratamentos não permitem o controlo de diferenciação e migração de células estaminais, após o implante e não são economicamente eficiente. Transplante de células geneticamente modificadas com funções benéficas antecipa melhorar o tratamento de muitas doenças. No entanto, as modificações genéticas de células são reconhecidas pelo sistema imunológico do hospedeiro, por isso, est....
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O protocolo do estudo foi aprovado pelos Comitês de Ética da Universidade do Estado de Ohio. As experiências com animais foram aprovados pelo protocolo do IACUC. Todos os procedimentos foram realizados sob o nível 2 de biossegurança armário com fluxo laminar. Nós seguimos todos os requisitos e procedimentos de segurança padrão. A técnica de microencapsulação para a preparação de microcápsulas foi realizada tal como descrito 17, 18.
1. Preparações de Materiais
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A Figura 1 mostra que todos os passos da produção de microesferas pode ser controlada ao microscópio. A Figura 2A mostra como a co-cultura de adipócitos com uma monocamada de células encapsuladas. A Figura 2B é um exemplo representativo de um estudo quantitativo utilizando adipócitos / microcápsulas co-culturas que foram descritas na secção 5. Os lisados de adipócitos foram analisadas utilizando a técnica Western Blot. Células encapsuladas não foram analisados neste.......
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Vários métodos têm sido usados para encapsular células, incluindo a secagem, extrusão, e emulsão 19. Neste método, as drageias de alginato são extrudidas através de uma agulha, em seguida, revestidas com PLL e o núcleo de alginato será dissolvido para completar o encapsulamento. Embora este método tenha sido utilizado durante anos, a formação dos grânulos com o tamanho desejado e a forma esférica é ainda difícil. O tamanho das cápsulas é altamente dependente da viscosidade da solução de alginato de sódio, o.......
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Não há conflitos de interesse declarados.
Gostaríamos de agradecer a Jennifer Petrosino e David DiSilvestro para a ajuda editorial. Esta pesquisa foi apoiada pelo Prêmio Número 20020728 da American Egg Board e Prêmio Número 10040042 da Novo Nordisk Farmacêutica, bem como pelo Centro de Inovação Alimentar, Instituto de Assuntos Internacionais, Centro de Pesquisa Avançada Functional Foods, e Empreendedorismo na OSU, bem como a National Science Foundation conceder CEE-0914790 (LJL). O projeto descrito foi apoiado pelo Prêmio Número R21OD017244 (OZ) e UL1RR025755 (OSUCCC) a partir do Centro Nacional de Pesquisa de Recursos, financiado pelo Escritório do Diretor, National Institutes of Health (OD) e apoiado pelo ....
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Dispositivo de encapsulamento (VAR V1) | Nisco | LIN-0042 | Nenhum |
| KD scientific syringe pump | KD scientific | 780100Y | Nenhum |
| Microscópio Olympus | Olympus Optical | IX70-S8F2 | Nenhum |
| Alginato de sódio | Sigma | MKBP8122V | Nenhum |
| Bromidrato de poli-L-lisina (PLL) | Sigma | 020M5006V | Nenhum |
| Cloreto de cálcio | Sigma | SLBJ2662V | Nenhum |
| Citrato de sódio tribásico di-hidratado | Sigma | 030M0200 | Nenhum |
| Cloreto de sódio | Sigma | SLBD2595V | Nenhum |
| Mini-PROTEAN TGX Gels | Bio-Rad | 456-1093 | Nenhum |
| anticorpo primário ATGL (de coelho) | Sinalização celular | 2138S | Nenhum |
| Anticorpo secundário (anti-coelho) | LI-COR | 926-68071 | Nenhum |
| Tampão de ensaio de radioimunoprecipitação (RIPA) | Boston BioProducts | D25Y6Z | Nenhum |
| Tamponado com fosfato solução salina (PBS) | Sigma | RNBD2893 | Nenhum |
| Tripsina | Gibco | 25200-056 | Nenhum |
| Cortizone 10 pomada anti-coceira | Cortizone 10 | C4029138 | Nenhum |
| Meio de Águia Modificado de Dulbecco (DMEM) | Gibco | 11965-092 | Nenhum |
| Soro de bezerro recém-nascido (CS) | Sigma | N4762 | Nenhum |
| Soro fetal bovino (FBS) | Sigma | F4135 | Nenhum |
| 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) | Sigma | I0516 | Nenhum |
| Dexametasona | Sigma | D4902 | Nenhum |
| Insulina (bovina) | Sigma | I5879 | Nenhum |
| Comprimidos de coquetel de inibidores de protease | Roche | 4693159001 | Nenhum |
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